Kit qPCR Cill Dhíreach RT – SYBR GREEN I Direct Cealla Lysis Cill Feisteáin qRT-PCR Aonchéime Réidh
Cur síos
Úsáideann an trealamh seo córas maoláin lysis uathúil ar féidir leis RNA a scaoileadh go tapa ó shamplaí cille saothraithe le haghaidh imoibrithe RT-qPCR, rud a chuireann deireadh leis an bpróiseas íonú RNA atá am-íditheach agus atá go leor oibre.Is féidir an teimpléad RNA a fháil i díreach 7 nóiméad.An 5×Díreach RT Mix agus 2×Is féidir le himoibrithe díreacha qPCR Mix-SYBR a sholáthraíonn an trealamh torthaí PCR cainníochtúla fíor-ama a fháil go tapa agus go héifeachtach.
5×Díreach RT Mix agus 2×Tá caoinfhulaingt láidir inhibitor ag Direct qPCR Mix-SYBR, agus is féidir lysate na samplaí a úsáid mar theimpléad do RT-qPCR go díreach.Sa trealamh seo tá an trascríobh aisiompaithe Foregene ard-chleamhnas RNA uathúil, agus polaiméaráis Hot D-Taq DNA, dNTPs, MgCl2, maolán imoibrithe, optimizer PCR agus cobhsaitheoir.
Sonraíochtaí
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Comhpháirteanna Kit
| Cuid I | Maolán CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Maolán ST | |
| Cuid II | Léirscriosán DNA |
| 5 × Meascán RT Díreach | |
| 2 × Díreach qPCR Measc-SYBR | |
| 50 × ROX Tagartha dath | |
| RNase-Free ddH2O | |
| Treoracha | |
Gnéithe agus buntáistí
■Simplí agus éifeachtach : le teicneolaíocht Cell Direct RT, is féidir samplaí RNA a fháil i díreach 7 nóiméad.
■ Tá an t-éileamh samplach beag, chomh híseal agus is féidir 10 gcealla a thástáil.
■ Tréchur ard: féadann sé RNA a bhrath go tapa i gcealla saothraithe i 384, 96, 24, 12, plátaí 6 thobair.
■ Is féidir le scriosán DNA géanóim scaoilte a bhaint go tapa, an tionchar ar thorthaí turgnamhacha ina dhiaidh sin a laghdú go mór.
■ Déanann córas optamaithe RT agus qPCR an trascríobh droim ar ais RT-PCR dhá chéim níos éifeachtaí agus PCR níos sainiúla, agus níos resistant d'inhibitors imoibriú RT-qPCR.
Feidhmchlár Kit
Scóip an iarratais: cealla saothraithe.
- RNA arna scaoileadh ag lysis samplach: infheidhme ach amháin maidir le teimpléad RT-qPCR den trealamh seo.
- Is féidir an trealamh a úsáid chun na críocha seo a leanas: anailís ar léiriú géine, fíorú éifeacht tosta géine trí mheán siRNA, scagadh drugaí, etc.
Léaráid
Stóráil agus Seilfré
Ba cheart Cuid I den trealamh seo a stóráil ag 4 ℃;Ba chóir Cuid II a stóráil ag -20 ℃.
Ba cheart Foregene Protease Plus II a stóráil ag 4℃, ná reoite ag -20 ℃.
Imoibrí 2×Ba chóir go díreach qPCR Mix-SYBR a stóráil ag -20℃sa dorchadas ;má úsáidtear é go minic, is féidir é a stóráil ag 4 freisin℃ le haghaidh stórála gearrthéarmach (úsáid suas laistigh de 10 lá).
Prionsabail deartha fíor-ama PCR primer
Ar Aghaidh Primer agus Droim ar ais Primer
Maidir le PCR Fíor-ama, tá dearadh primer an-tábhachtach.Tá baint ag primers le sainiúlacht agus le héifeachtúlacht an aimplithe PCR, agus is féidir iad a dhearadh ag tagairt do na prionsabail seo a leanas:
Fad primer: 18-30bp.
Ábhar GC: 40-60%.
Luach Tm: Is féidir le bogearraí deartha primer, mar shampla Primer 5, luach Tm an primer a thabhairt.Ba cheart go mbeadh luachanna Tm na bpriméirí in aghaidh an tsrutha agus iartheachtach chomh gar agus is féidir.Is féidir an fhoirmle ríomh Tm a úsáid freisin: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nuair a bhíonn PCR á fheidhmiú, roghnaítear teocht faoi bhun luach an primer Tm de 5 °C mar an teocht anáil (is féidir leis an méadú comhfhreagrach ar an teocht annealaithe sainiúlacht an imoibrithe PCR a mhéadú).
Primers agus táirgí PCR:
Dearadh primer PCR fad táirge aimpliú is fearr 100-150bp.
Ba cheart primers dearaidh i limistéar struchtúrach tánaisteach an teimpléid a sheachaint oiread agus is féidir.
Seachain foirmiú 2 bhonn chomhlántacha nó níos mó idir na 3′ foircinn na primers in aghaidh an tsrutha agus le sruth.
Ní féidir le bonn teirminéil primer 3′ a bheith i láthair le 3 G nó C breise as a chéile.
Ní féidir struchtúir chomhlántacha a bheith ag na primers féin, nó cruthófar struchtúr hairpin, a dhéanann difear d'aimpliú PCR.
Ba cheart ATCG a dháileadh chomh cothrom agus is féidir sa seicheamh primer, agus ba cheart an bonn teirminéil 3′ a sheachaint mar T.
Aguisín 1:Cell Direct RT-qPCR Kit pacáiste forlíonta a chomhdhéanann í
1.Réiteach Lysis Cell
|
| |||
| Comhpháirteanna Kit (córas lysis 24-tobar / tobar) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Cuidmé | Maolán CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Maolán ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| CuidII | Léirscriosán DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Meascán
|
| |
| Comhpháirteanna Kit (córas imoibrithe 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Meascán RT Díreach | 800 μl |
| RNase-DDH saor in aisce2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Comhpháirteanna Kit (córas imoibrithe 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Díreach qPCR Measc-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX Tagartha dath | 40 μl | 200 μl |
| RNase-DDH saor in aisce2O | 1.7 ml | 10 ml |
Lámhleabhair Treoraithe:
