Míniú ar théarmaí bunúsacha bitheolaíocht mhóilíneach
1. cDNA agus cccDNA: Is cDNA DNA dúbailte-snáithe shintéisiú ag transcriptase droim ar ais ó mRNA;Is cccDNA DNA ciorclach dúnta dúbailte-shnáithe plasmid saor ó na crómasóim.
2. Aonad fillte caighdeánach: is féidir leis an aonad struchtúr tánaisteach próitéin α-helix agus β-bileog bloic struchtúracha a fhoirmiú le socruithe geoiméadracha speisialta trí pholaipeiptítí nasctha éagsúla.De ghnáth tugtar struchtúr super tánaisteach ar an gcineál fillte cinnithe seo.Is féidir na cineálacha fillte seo a chur síos ar bheagnach gach struchtúr treasach, agus fiú a gcineálacha comhcheangailte, mar sin tugtar aonaid fillte caighdeánach orthu freisin.
3. CBT: próitéin receptor timthriallach adenosine monophosphate (cAMP) CRP (próitéin receptor cAMP), ar a dtugtar an casta a foirmíodh tar éis an teaglaim de cAMP agus CRP próitéin gníomhachtaithe CAP (próitéin gníomhachtaithe cAMP)
4. Seicheamh palindromach: Seicheamh comhlántach droim ar ais de chuid deighleog DNA, go minic suíomh einsím srianta.
5. micRNA: RNA trasnaíochta comhlántach nó RNA antisense, atá comhlántach leis an seicheamh mRNA agus a chuireann bac ar aistriú mRNA.
6. Ribozyme: RNA le gníomhaíocht chatalaíoch, a bhfuil ról autocatalytic aige i bpróiseas splicing RNA.
7. Móitíf: Tá roinnt réigiún áitiúla a bhfuil cruth tríthoiseach den chineál céanna agus topology acu i struchtúr spásúil móilíní próitéine
8. Peptíde comhartha: peptide le 15-36 iarmhair aimínaigéad ag an N-terminus le linn sintéise próitéin, a threoraíonn transmembrane an phróitéin.
9. Attenuator: Seicheamh núicléitíde idir réigiún oibreora agus géin struchtúrach a chuireann deireadh le trascríobh.
10. Spota Draíocht: Nuair a fhásann an baictéar agus go dtiocfaidh sé ar easpa iomlán aimínaigéid, déanfaidh na baictéir freagairt éigeandála chun stop a chur le léiriú gach géinte.Is iad na comharthaí a ghineann an fhreagairt éigeandála seo ná guanóisín tetraphosphate (ppGpp) agus peinteafosine guanóisín (pppGpp).Ní hamháin go bhfuil ról PpGpp agus pppGpp ach amháin nó cúpla operons, ach bíonn tionchar aige ar líon mór acu, mar sin tugtar sár-rialtóirí nó spotaí draíochta orthu.
11. Eilimint tionscnóra in aghaidh an tsrutha: tagraíonn sé don seicheamh DNA a bhfuil ról rialála aige i ngníomhaíocht an tionscnóra, amhail TATA sa réigiún -10, TGACA sa réigiún -35, feabhsaitheoirí agus maolaitheoirí.
12. Taiscéalaí DNA: teascán lipéadaithe DNA le seicheamh aitheanta, a úsáidtear go forleathan chun seichimh anaithnide agus spriocghéinte a bhrath.
13. Seicheamh SD: Is é an seicheamh ceangailteach de ribosome agus mRNA, a rialaíonn aistriúchán.
14. Antashubstaint mhonaclónach: Antashubstaint a ghníomhaíonn in aghaidh aon chinntithigh antaigineach amháin.
15. Cosmid: Is veicteoir DNA eisghineach é atá tógtha go saorga a choinníonn na réigiúin COS ag an dá cheann den phage agus atá nasctha leis an plasmid.
16. Scagadh láthair gorm-bán: géine LacZ (ionchódú β-galactosidase), is féidir leis an einsím an tsubstráit chromogenic X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactosidase) a dhianscaoileadh gorm a tháirgeadh, rud a fhágann go bhfuil an brú gorm.Nuair a chuirtear isteach an DNA exogenous, ní féidir an géine LacZ a chur in iúl, agus tá an brú bán, chun na baictéir athchuingeacha a scagadh.Tugtar scagadh gorm-bán air seo.
17. Eilimint Cisghníomhaíoch: Seicheamh sonrach bonn in DNA a rialaíonn slonn géine.
18. Einsím Klenow: Blúire mór DNA polaiméaráis I, ach amháin go mbaintear an ghníomhaíocht exonuclease 5' 3' as an DNA polaiméaráise I holoenzyme
19. PCR ancaire: úsáidtear é chun an DNA inspéise a mhéadú le seicheamh aitheanta ag foirceann amháin.Cuireadh eireaball poly-dG le foirceann amháin den seicheamh anaithnid, agus ansin baineadh úsáid as an poly-dC agus an seicheamh aitheanta mar primers le haghaidh aimpliú PCR.
20. Próitéin chomhleá: Tá géine próitéin eukaryotic ceangailte le géine exogenous, agus cuirtear an próitéin comhdhéanta d'aistriú próitéin géine bunaidh agus próitéin exogenous in iúl ag an am céanna.
Téarmaí eile bitheolaíocht mhóilíneach
1. Is é an léarscáil fhisiciúil DNA an t-ord ina bhfuil na blúirí (srianta endonuclease-digested) den mhóilín DNA eagraithe.
2. Tá scoilteacht RNase roinnte ina dhá chineál (autocatalysis) agus (heterocatalysis).
3. Tá trí fhachtóir tionscanta i bprócaryotes, is iad sin (IF-1), (IF-2) agus (IF-3).
4. Tá treoir ag teastáil ó phróitéiní transmembrane (peptides comhartha), agus is é ról na chaperones próitéin (cabhraíonn sé leis an slabhra peptide a fhilleadh isteach i gcomhfhoirmiú dúchais an phróitéin).
5. Is féidir gnéithe i dtionscnóirí a roinnt go ginearálta ina dhá chineál: (eilimintí tionscnóra lárnacha) agus (eilimintí tionscnóra in aghaidh an tsrutha).
6. Áirítear ar ábhar taighde na bitheolaíochta mhóilíneach go príomha trí chuid: (bitheolaíocht mhóilíneach struchtúrach), (léiriú géine agus rialachán), agus (teicneolaíocht athcheangail DNA).
7. Is iad an dá phríomh-turgnamh a thaispeánann gurb é DNA an t-ábhar géiniteach ná (ionfhabhtú pneumococcus i lucha) agus (ionfhabhtú T2 phage Escherichia coli).poitéinseal).
8. Tá dhá phríomhdhifríocht idir hnRNA agus mRNA: (tá hnRNA splicáilte sa phróiseas a thiontú go mRNA), (cuirtear deireadh 5' an mRNA le caipín m7pGppp, agus tá polyadylation breise ag deireadh 3' eireaball aigéad mRNA (polyA).
9. Is iad na buntáistí a bhaineann leis an bhfoirm il-fho-aonad próitéine (is modh eacnamaíoch é fo-aonad maidir le húsáid DNA), (is féidir leis an tionchar a bhíonn ag earráidí randamach i sintéis próitéin ar ghníomhaíocht próitéin a laghdú), (is féidir le gníomhaíocht a bheith an-éifeachtach agus go tapa a oscailt agus a dhúnadh).
10. Áirítear ar an ábhar is mó de mheicníocht fillte próitéin teoiric núiclithe chéad (núiclithe), (saibhriú struchtúrach), (athshocrú deiridh).
11. Tá dhá éifeacht ag galactós ar bhaictéir;ar thaobh amháin (is féidir é a úsáid mar fhoinse carbóin le haghaidh fás cille);ar an láimh eile (is comhpháirt den bhalla cille é freisin).Dá bhrí sin, tá gá le tionscnóir cAMP-CRP-neamhspleách S2 don shintéis buan ar an leibhéal cúlra;ag an am céanna, tá gá le tionscnóir cAMP-CRP-spleách S1 chun an tsintéis ardleibhéil a rialáil.Tosaíonn an trascríobh ó ( S2 ) le G agus ó ( S1 ) gan G .
12. Tugtar (clónáil géine) nó (clónáil mhóilíneach) ar theicneolaíocht athchuingreach DNA freisin.Is é an sprioc deiridh (an DNA faisnéise géiniteach in orgánach amháin a aistriú isteach in orgánach eile).Cuimsíonn gnáth-thurgnamh athcheangail DNA na céimeanna seo a leanas de ghnáth: (1) Bain an spriocghéine (nó géine eisghineach) an orgánaigh deontóra, agus ceangail go heinsímeach é le móilín DNA eile (veicteoir clónála) chun móilín DNA athchuingreach nua a dhéanamh.② Aistrítear an móilín DNA athchuingreach isteach sa chill faighteora agus a mhacasamhlú sa chill faighteora.Tugtar claochlú ar an bpróiseas seo.③ Scáileán agus sainaithin na cealla faighteora sin a d'ionsú an DNA athchuingreach.④ Coth na cealla ina bhfuil DNA athchuingreach i gcainníochtaí móra chun a fháil amach an bhfuil an ghéin chúnaimh choigríche in iúl.
13. Tá dhá chineál macasamhlú plasmid ann: tugtar iad siúd atá faoi rialú docht ag sintéis próitéin cille óstach (plasmids daingean), agus iad siúd nach bhfuil faoi rialú docht ag sintéis próitéin cille óstach ar a dtugtar (plasmids relaxed).
14. Ba cheart go mbeadh na coinníollacha seo a leanas ag an gcóras imoibrithe PCR: a.Réamhiméirí DNA (thart ar 20 bonn) le seichimh chomhlántacha ag gach ceann den dá shnáithe den spriocghéine atá le scaradh.b.Einsímí le cobhsaíocht theirmeach cosúil le: TagDNA polymerase.c, dNTPd, seicheamh spéise DNA mar theimpléad
15. Áirítear le próiseas imoibrithe bunúsach PCR trí chéim: (dínádúrú), (annealing), agus (síneadh).
16. Áirítear le próiseas bunúsach ainmhithe trasgenacha: ① Géine coigríche clónáilte a thabhairt isteach i núicléas ubh toirchithe nó gascheall suthach;② Trasphlandú na huibhe toirchithe ionaclaithe nó an ghascheall suthach isteach san uterus baineann;③Comhlánaigh forbairt suthach agus fás Don sliocht le géinte coigríche;④ Bain úsáid as na hainmhithe seo atá in ann próitéiní eachtracha a tháirgeadh mar stoc pórúcháin chun línte homozygous nua a phórú.
17. Gintear línte cille hibridoma trí chealla hibrideacha (spleen B) le cealla (myeloma), agus toisc gur féidir le (cealla spleen) úsáid a bhaint as hypoxanthine agus (cealla cnámh) feidhmeanna rannáin cille a sholáthar, is féidir iad a fhás i meán HAT.fás.
18. Le taighde a dhoimhniú, tugtar antasubstaintí (antasubstaintí polyclonal) ar an gcéad ghlúin, an dara glúin (antasubstaintí monoclonal), agus an tríú glúin (antasubstaintí innealtóireachta géiniteacha).
19. Faoi láthair, tá innealtóireacht ghéiniteach víris feithidí dírithe go príomha ar baculovirus, a léirítear le tabhairt isteach (géine tocsain exogenous);(géinte a chuireann isteach ar ghnáth-shaolré feithidí);(athrú ar ghéinte víreas).
20. Is iad na fachtóirí próitéine trasghníomhaithe a fhreagraíonn do na heilimintí coitianta TATA, GC, agus CAAT sa tionscnóir mamaigh RNA polymerase II ná (TFIID), (SP-1) agus (CTF/NF1), faoi seach.
fiche haon.Is iad na fachtóirí trascríobh bunúsacha de RNA polymerase Ⅱ, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, agus is é a seicheamh ceangailteach: (D, A, B, E).Ina bhfuil feidhm TFII-D (ceangailteach ar bhosca TATA).
fiche dó.Oibríonn an chuid is mó de na fachtóirí trascríobh a cheanglaíonn le DNA i bhfoirm dimers.Is iad seo a leanas go hiondúil fearainn fheidhmiúla na bhfachtóirí trascríobh atá ina gceangal le DNA (helix-turn-helix), (móitíf finger since), (bun-leucine) móitíf zipper).
fiche trí.Tá trí chineál modhanna scoilteachta endonuclease srianta ann: (gearrtha ar thaobh 5 'an ais siméadrachta chun foircinn ghreamaitheacha 5' a ghiniúint), (gearrtha ar thaobh 3 'an ais siméadrachta chun foircinn ghreamaitheacha 3' a ghiniúint (gearrtha ag an ais siméadrachta chun codanna cothrom a ghiniúint) ).
fiche ceathair.Tá trí chumraíocht dhifriúla ag DNA Plasmid: (Cumraíocht SC), (Cumraíocht oc), (Cumraíocht L).Is é an chéad cheann i leictreafóiréis (cumraíocht SC).
25. Córais léiriú géine exogenous, go príomha (Escherichia coli), (Giosta), (Feithidí) agus (tábla cille mamail).
26. Is iad na modhanna a úsáidtear go coitianta le haghaidh ainmhithe trasgenacha: (modh ionfhabhtaithe retroviral), (modh microinstealladh DNA), (modh gaschealla suthacha).
Feidhm bitheolaíocht mhóilíneach
1. Ainmnigh feidhmeanna níos mó ná 5 RNA?
Aistriú RNA tRNA Aimínaigéad a aistriú Ribosome RNA rRNA Ribosome comhdhéanta de theachtaire RNA mRNA Teimpléad sintéise próitéine ilchineálach núicléach RNA hnRNA Réamhtheachtaí mRNA aibí núicléach beag RNA snRNA Bainteach le hnRNA splicing RNA cíteaplasma beag scRNA/7SL-RNA próitéin Plasma reticulum-ionadaithe agus comhpháirteanna RNA synthesize comhartha reticulum-áitithe RNA gníomhach einsímeach
2. Cad é an príomhdhifríocht idir tionscnóirí prócarótacha agus tionscnóirí eocaryotic?
Prokaryotic TTGACA --- TATAAT------ Suíomh Tionscnaimh-35 -10 Feabhsaitheoir Eukaryotic --- GC --- CAAT---- TATAA-5mGpp-Láithreán Tionscnaimh-110 -70 -25
3. Cad iad na príomhghnéithe a bhaineann le tógáil shaorga plasmids nádúrtha?
Is minic a bhíonn lochtanna ag plasmid nádúrtha, agus mar sin níl siad oiriúnach le húsáid mar iompróirí d'innealtóireacht ghéiniteach, agus ní mór iad a mhodhnú agus a thógáil: a.Cuir géinte marcála roghnóireachta oiriúnacha leis, mar shampla dhá cheann nó níos mó, atá éasca le húsáid le haghaidh roghnúcháin, géinte antaibheathach de ghnáth.b.Méadú nó laghdú ar shuíomhanna gearrtha einsímí oiriúnacha chun athchuigniú a éascú.c.Giorraigh an fad, gearrtha amach blúirí gan ghá, feabhas a chur ar éifeachtúlacht allmhairithe agus méadú ar an gcumas luchtaithe.d.Athraigh an macasamhail, ó daingean go scaoilte, ó níos lú cóipeanna go dtí níos mó cóipeanna.e.Cuir eilimintí géiniteacha speisialta de réir riachtanais speisialta na hinnealtóireachta géiniteacha
4. Tabhair sampla de mhodh chun scagadh difreálach a dhéanamh ar cDNA a bhaineann go sonrach le fíocháin?
Ullmhaítear dhá dhaonra cille, cuirtear an spriocghéine in iúl nó in iúl go mór i gceann de na cealla, agus níl an spriocghéine sainráite nó in iúl go híseal sa chill eile, agus ansin faightear an spriocghéine trí hibridiú agus comparáid.Mar shampla, le linn siadaí a tharlaíonn agus a fhorbairt, cuirfidh cealla meall i láthair mRNAanna le leibhéil léirithe éagsúla ná gnáthchealla.Mar sin, is féidir géinte a bhaineann le siadaí a scagadh amach trí hibridiú difreálach.Is féidir an modh ionduchtaithe a úsáid freisin chun scagadh a dhéanamh ar na géinte a bhfuil a slonn spreagtha.
5. Línte cille hibrideach a ghiniúint agus a scagadh?
Cealla Spleen B + cealla myeloma, cuir glycol poileitiléin (PEG) chun comhleá cille a chur chun cinn, agus na cealla comhleá B-myeloma splenic a fhástar i meán HAT (ina bhfuil hypoxanthine, aminopterin, T) ag leathnú go leanúnach.Áirítear sa chomhleá cille: cealla comhleá spleen-spleen: in ann fás, ní féidir cealla spleen a shaothrú in vitro.Cealla comhleá cnámh-cnámh: ní féidir úsáid a bhaint as hipopxanthine, ach is féidir purine a shintéisiú tríd an dara cosán ag baint úsáide as folate reductase.Coscann Aminopterin folate reductase agus mar sin ní féidir leis fás.Cealla comhleá cnámh-spleen: is féidir leo fás i HAT, is féidir le cealla spleen úsáid a bhaint as hypoxanthine, agus soláthraíonn cealla cnámh feidhm rannán cille.
6. Cad é an prionsabal agus an modh chun struchtúr príomhúil DNA a chinneadh ag an modh foirceanta críochfoirt dideoxy (modh Sanger)?
Is é an prionsabal ná úsáid a bhaint as críochnóir slabhra núicléitíde—2,,3,-dé-ocsa-núicléitíd chun síneadh DNA a fhoirceannadh.Toisc nach bhfuil an 3-OH ann atá riachtanach chun bannaí 3/5/fosfadiester a fhoirmiú, a luaithe a ionchorpraítear sa slabhra DNA é, ní féidir an slabhra DNA a shíneadh tuilleadh.De réir phrionsabal na péireála bonn, gach uair a theastaíonn DNA polymerase dNMP chun páirt a ghlacadh sa slabhra DNA leathnaithe de ghnáth, tá dhá fhéidearthacht ann, is é ceann amháin páirt a ghlacadh i ddNTP, rud a fhágann go gcuirfear deireadh le síneadh slabhra deoxynucleotide;is é an ceann eile a bheith rannpháirteach i dNTP , ionas gur féidir leis an slabhra DNA leanúint ar aghaidh ag síneadh go dtí go mbeidh an chéad ddNTP eile ionchorpraithe.De réir an mhodha seo, is féidir grúpa blúirí DNA de fhaid éagsúla a chríochnaíonn i ddNTP a fháil.Is é an modh a roinnt ina cheithre ghrúpa faoi seach ddAMP, ddGMP, ddCMP, agus ddTMP.Tar éis an imoibrithe, is féidir le leictreafóiréis glóthach polyacrylamide an seicheamh DNA a léamh de réir na mbannaí snámha.
7. Cad é an éifeacht rialála dearfach atá ag próitéin gníomhachtaithe (CAP) ar thrascríobh?
Próitéin receptor timthriallach adenylate (cAMP) CRP (próitéin receptor cAMP), an casta atá déanta ag an meascán de cAMP agus CRP ar a dtugtar CBT (próitéin cAMPactivated).Nuair a fhástar E. coli i meán easpa glúcóis, méadaíonn sintéis CBT, agus tá feidhm ag CBT tionscnóirí a ghníomhachtú mar lachtós (Lac).Níl an ghné seicheamh réigiún -35 tipiciúil (TTGACA) ag roinnt tionscnóirí atá ag brath ar CRP atá ag tionscnóirí coitianta.Mar sin, tá sé deacair do RNA polymerase a cheangal leis.Láithreacht CBT (feidhm): is féidir leis an tairiseach ceangailteach de einsím agus tionscnóir a fheabhsú go suntasach.Taispeánann sé an dá ghné seo a leanas go príomha: ① Cuidíonn CBT leis an móilín einsím a threorú i gceart trí athrú a dhéanamh ar chomhfhoirmiú an tionscnóra agus ar an idirghníomhú leis an einsím, ionas go gcomhcheangal leis an réigiún -10 agus ról a imirt in ionad feidhm an réigiúin -35.Is féidir le ②CAP bac a chur freisin ar cheangal RNA polaiméaráis le suíomhanna eile i DNA, rud a mhéadaíonn an dóchúlacht go mbeidh sé ceangailteach lena tionscnóir sonrach.
8. Cad iad na céimeanna a chuirtear san áireamh de ghnáth i dturgnamh athcheangail DNA tipiciúil?
a.Sliocht géine sprice (nó géine exogenous) an orgánaigh deontóra, agus ceangail go heinsímeach é le móilín DNA eile (veicteora clónála) chun móilín DNA athchuingreach nua a dhéanamh.b.Aistrigh an móilín DNA athchuingreach isteach sa chill faighteora agus déan é a mhacasamhlú agus a chaomhnú sa chill faighteora.Tugtar claochlú ar an bpróiseas seo.c.Scáileán agus sainaithin na cealla faighteora sin a d'ionsú an DNA athchuingreach.d.Cultúir mais na cealla ina bhfuil an DNA athchuingreach chun a fháil amach an bhfuil an ghéin chúnaimh choigríche in iúl.
9. Leabharlann ghéine a thógáil Tugtar trí mhodh chun athchuingíní a scagadh agus déantar cur síos gairid ar an bpróiseas.
Scagadh frithsheasmhachta in aghaidh antaibheathach, díghníomhú ionsáite friotaíochta, scagadh spota gorm-bán nó scagadh PCR, scagadh difreálach, taiscéalaí DNA Iompraíonn formhór veicteoirí clónála géinte frithsheasmhachta in aghaidh antaibheathach (frith-ampicillin, tetracycline).Nuair a aistrítear an plasmid isteach i Escherichia coli, gheobhaidh na baictéir friotaíocht, agus ní bheidh friotaíocht ag na baictéir sin gan aistriú.Ach ní féidir idirdhealú a dhéanamh cé acu an ndearnadh é a atheagrú nó nach bhfuil.I veicteoir ina bhfuil dhá ghéinte friotaíochta, má chuirtear blúire DNA eachtrach isteach i gceann de na géinte agus go n-eascraíonn sé an géine a dhíghníomhú, is féidir dhá rialú pláta ina bhfuil drugaí éagsúla a úsáid chun scagadh le haghaidh athchuingíní dearfacha.Mar shampla, tá géine LacZ (ionchódú β-galactosidase) sa plasmid pUC, ar féidir leis an tsubstráit chromogenic X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactosidase) a dhianscaoileadh chun gorm a tháirgeadh, rud a fhágann go bhfuil an brú gorm.Nuair a chuirtear isteach an DNA eachtrach, ní féidir an géine LacZ a chur in iúl, agus tá an brú bán, chun na baictéir athchuingreach a scagadh.
10. Mínigh an bunphróiseas chun ainmhithe trasgenacha a fháil trí ghaschealla suthacha?
Is cealla suthach iad gaschealla suthacha (ES) le linn forbairt suthach, ar féidir iad a shaothrú agus a iomadú go saorga agus a bhfuil an fheidhm acu idirdhealú a dhéanamh i gcineálacha eile cealla.Cultúr cealla ES: Tá mais chill istigh an blastocyst aonraithe agus saothraithe.Nuair a shaothraítear ES i gciseal saor ó fhriothálacha, déanfaidh sé idirdhealú i gcealla feidhmiúla éagsúla cosúil le cealla muscle agus cealla N.Nuair a shaothraítear é i meán ina bhfuil fibroblasts, coimeádfaidh ES an fheidhm dhifreála.Is féidir ES a ionramháil go géiniteach, agus is féidir a fheidhm difreála a chomhtháthú gan tionchar a imirt ar a fheidhm dhifreála, rud a réitíonn fadhb an chomhtháthaithe randamach.Tabhair géinte exogenous isteach i gaschealla suthacha, ansin ionchlannú isteach in uterus na lucha baineanna atá ag iompar clainne, forbróidh siad ina laonna, agus crosáil iad chun lucha homaisigeacha a fháil.
