Treoir Anailíse Fadhbanna

Déantar an anailís seo a leanas ar na fadhbanna a d’fhéadfadh teacht ort iIomlán GléasraRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

Tá an colún casadh clogged

Mar thoradh ar bhlocáil an cholúin casadh, laghdófar an toradh RNA nó fiú ní féidir é a íonú chun RNA a fháil, agus beidh cáilíocht an RNA a fhaightear íseal.

Anailís ar Chúiseanna Coitianta:

1. Níl an sampla briste go hiomlán.

Is féidir le ilroinnt samplaí neamhiomlán bac a chur ar an gColún Glanadh DNA, rud a d'fhéadfadh tionchar a bheith aige freisin ar tháirgeacht agus ar cháilíocht RNA.Molaimid nuair a bhíonn ilroinnt samplach á déanamh agat, go meileann tú go tapa i méideanna leordhóthanacha nítrigine leachtach chun fíocháin ar nós ballaí cille agus seicní cille na samplaí a bhriseadh suas a oiread agus is féidir.Le haghaidh samplaí plandaí de pholaisiúicrídí polyphenol, molaimid go n-úsáideann tú Plant Total RNA Isolation Kit Plus.

2.Aspirate an Supernatant DNA-Glanadh Colún, asúite an millíní smionagar cille féideartha.

Is féidir le millíní smionagar cille asúite an Colún RNA amháin a chlogadh le linn nósanna imeachta asaithe RNA (féach céim 5 den nós imeachta, céim 6 den nós imeachta polyphenol polaisiúicríde).Molaimid nach mór a bheith cúramach agus an sárshaothar seo á asú chun smionagar cille a sheachaint.

3. Tá méid tosaigh an tsampla ró-mhór.

Mar thoradh ar úsáid iomarcach samplaí beidh ilroinnt neamhiomlán sampla nó lysis neamhiomlán na gceall ag Buffer PRL1 nó Buffer PSL1, agus mar thoradh air sin beidh colún íonú clogged le haghaidh oibríochtaí íonúcháin.Tá uasmhéid tosaigh de 50 mg in aghaidh an íonú aonair ar shampla oibrithe ag Kit Iomlán Leithlisithe RNA Gléasra.Le haghaidh samplaí plandaí de pholaisiúicrídí polyphenol, molaimid duit triail a bhaint as an Kit Iomlán Leithlisithe RNA Plandaí Plus.

4. Tá teocht an lártheifneora ró-íseal.

Leithlisiú agus íonú RNA iomlán ach amháin i gcás cur isteach nítrigine leachtach ar fhíochán samplach, déantar gach céim ag teocht an tseomra (20-25 °C).Tá teocht faoi 20 °C ag roinnt lártheifneoir ar theocht íseal, rud a d'fhéadfadh bacainní a chur faoi deara sa Cholún Glantacháin DNA agus/nó sa Cholún RNA amháin.Má tharlaíonn sé seo, socraigh teocht an lártheifneora go 20-25 °C agus déan an meascán lysis roimh an te agus/nó cuir an forshnáthán deighilte eatánóil go 37 °C.

Níl aon RNA bhaintear nó RNA táirgeacht íseal

De ghnáth tá go leor fachtóirí ann a théann i bhfeidhm ar an éifeachtúlacht aisghabhála, mar shampla: ábhar RNA samplach, modh oibríochta, an toirt elution, etc.

Anailís ar chúiseanna coitianta mar atá thíos:

1.Rinneadh lártheifneoiriú folctha oighir nó teocht íseal (4°C) le linn na hoibríochta.

Moladh: Oibriú ag teocht an tseomra (15-25 ° C) sa phróiseas iomlán, ná folcadán oighir agus lártheifneoiriú teocht íseal.

       2.Tá an RNA díghrádaithe de bharr caomhnú míchuí an tsampla nó caomhnú fadtéarmach an tsampla.

Moladh: Ba chóir samplaí úr-bhailithe a reoite go tapa i nítrigin leachtach, agus ansin iad a stóráil ag -80 ° C ar feadh i bhfad, chun samplaí a reo arís agus arís eile a sheachaint agus a leá;nó soak láithreach na samplaí i dtuaslagán cobhsaitheoir RNA RNAlater (samplaí ainmhithe).

       3.Mar thoradh ar ilroinnt samplaí neamhleor agus lysis cuirtear bac ar an gcolún íonúcháin.

Moladh: Nuair a bhíonn an fíochán á mheilt, cinntigh go bhfuil an fíochán sách talamh, agus go tapa aistrigh é chuig an Buffer PSL1 réamhullmhaithe (dearbhaigh go bhfuil an cion ceart β-ME curtha leis, féach céim 1 den nós imeachta).

4.Cuireadh an eluent isteach go mícheart.

Moladh: Bí cinnte go bhfuil RNase-Free ddH₂Tá O dripped isteach i lár an membrane colún íonú.

5.Níor cuireadh an méid ceart eatánóil absalóideach le Buffer PSL2 nó Maolán PRW2.

Moladh: Lean na treoracha le do thoil, cuir an méid ceart eatánóil absalóideach le Buffer PSL2 agus Buffer PRW2 agus measc go maith sula n-úsáidfear an trealamh.

6.Tá an méid sampla fíocháin míchuí.

Moladh: Úsáid 50 mg fíocháin in aghaidh an 500 μl de Buffer PSL1.Le húsáid an iomarca fíocháin laghdófar an méid RNA a bhaintear as agus laghdófar íonacht an RNA mar thoradh air freisin.Molaimid go láidir nár chóir go mbeadh an dáileog sampla tosaigh níos mó ná 50 mg in aghaidh an oibríocht eastósctha RNA.

7. Toirt elution míchuí nó elution neamhiomlán.

Moladh: Is é 50-200 μl toirt eluent an cholúin íonúcháin;mura bhfuil an éifeacht elution sásúil, moltar an t-am ag teocht an tseomra a leathnú tar éis ddH RNase-Free réamhthéite a chur leis₂O, mar shampla 5-10min.

8.Tá iarmhar eatánóil ag an gcolún íonú tar éis níocháin le Buffer PRW2.

   Moladh: Má tá an feadán folamh lártheifneoirithe ar feadh 1 nóiméad agus go bhfuil eatánól fós fágtha tar éis níocháin i Buffer PRW2, is féidir leat am lártheifneoirithe an fheadáin folamh a mhéadú go 2 min, nó cuir an colún íonú ag teocht an tseomra ar feadh 5 nóiméad chun an eatánól iarmharach a bhaint go hiomlán.

9. Úsáideadh an trealamh go mícheart.

   Moladh: I gcás samplaí plandaí de pholaisiúicrídí ilfheinólacha, d’fhéadfadh sé nach mbeifear in ann samplaí idéalach RNA a fháil trí úsáid a bhaint as feisteáin choitianta ar nós Gléasra Leithlisithe RNA Iomlán Plandaí.Molaimid duit Plant Total RNA IsolationKit Plus a úsáid, atá deartha go speisialta le haghaidh samplaí plandaí polaisiúicríde polyphenolic.Tá trealamh a forbraíodh go speisialta do bhaint RNA as samplaí plandaí polyphenol agus polaisiúicríde....

Tá luach OD260/OD280 íseal

elution RNA le ddH₂O agus a úsáidtear le haghaidh léamha speictreafótaiméadar bíonn luachanna ísle OD260/OD280 ann.Molaimid úsáid a bhaint as 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (seachas RNase-Free ddH₂O go RNA mionlach) chun luachanna réasúnta cearta OD260/OD280 a fháil, féach “Tiúchan RNA agus Measúnachtaí Íonúcháin” ar leathanach 19.

Tá an RNA íonaithe díghrádaithe

Tá baint ag cáilíocht RNA íonaithe le fachtóirí cosúil le caomhnú samplaí, éilliú RNase, agus ionramháil.

Anailís ar chúiseanna coitianta:

Níor stóráladh samplaí 1.Tissue in am tar éis an bhailiúcháin.

    Moladh: Mura n-úsáidtear na samplaí fíocháin in am tar éis iad a bhailiú, le do thoil iad a stóráil i nítrigine leachtach ag teocht íseal láithreach nó iad a aistriú go -80 ° C le haghaidh stórála fadtéarmach tar éis reo tapa i nítrigine leachtach, nó láithreach na samplaí a thumadh i dtuaslagán cobhsaitheoir RNA RNAlater (samplaí ainmhithe).Le haghaidh eastóscadh RNA, déan iarracht samplaí fíocháin úr-bhailithe a úsáid.

2. Reo arís agus arís eile samplaí fíocháin.

   Moladh: Nuair a bhíonn samplaí fíocháin á stóráil, is fearr iad a ghearradh ina bpíosaí beaga le caomhnú, agus cuid díobh a bhaint amach agus iad á n-úsáid chun díghrádú RNA de bharr reo agus leá na samplaí arís agus arís eile a sheachaint.

Tugtar 3.RNase isteach sa seomra oibríochta nó ní chaitear lámhainní indiúscartha, maisc, etc.

   Moladh: Is fearr turgnaimh eastóscadh RNA a dhéanamh in oibríochtaí RNA ar leithligh, agus ba cheart an tábla saotharlainne a ghlanadh roimh an turgnamh, agus ba chóir lámhainní agus maisc indiúscartha a chaitheamh le linn an turgnaimh chun díghrádú RNA de bharr tabhairt isteach RNase a sheachaint a mhéid is mó.

4.Tá an t-imoibrí éillithe ag RNase le linn úsáide.

   Moladh: Cuir sraith nua d’fheisteáin eastósctha RNA iomlána plandaí ina ionad le haghaidh turgnaimh ghaolmhara.

5. Tá na feadáin lártheifneora agus na leideanna pípéad a úsáidtear le haghaidh ionramhála RNA truaillithe le RNase.

Moladh: Déan cinnte go bhfuil na feadáin lártheifneora, na leideanna pípéad, na pípéid, etc. a úsáidtear in eastóscadh RNA, saor ó RNase.

Lámhleabhair Treoraithe:

Gléasra Lámhleabhar Trealamh Leithlisiú Iomlán RNA RNA