Escherichia coli O157:H7 Trealamh Braite Aigéad Núicléach (Modh Taiscéalaithe Fluaraiseacha PCR)
Cur Síos Kit:
Cat.Uimh.FP102
Úsáidtear é chun E. coli O157:H7 a bhrath agus a scagadh go tapa i mbia, i mbeatha, i samplaí uisce agus i samplaí comhshaoil.
Cur síos
Úsáidtear é chun E. coli O157:H7 a bhrath agus a scagadh go tapa i mbia, i mbeatha, i samplaí uisce agus i samplaí comhshaoil.
[Prionsabal na tástála]De réir phrionsabal na teicneolaíochta PCR fluaraiseacha, déantar primers sonracha agus tóireadóirí Taqman a dhearadh le haghaidh géine sonrach Escherichia coli O157: H7, agus braite ag ionstraim fluaraiseacha PCR, ionas go bhféadfar a bhrath Escherichia coli O157: H7 Brath cáilíochtúil DNA.
Ábhar Kit
Nóta: Níl taiscéalaí cainéal ROX san áireamh.
| Cospaints | Sonraíocht | Qaontacht |
| Maolán A | feadán | 1 |
| Maolán B | feadán | 1 |
| Rialú dearfach | feadán | 1 |
| Rialú diúltach | feadán | 1 |
Úsáid Ionchais
Úsáidtear é le haghaidh bhrath agus scagadh tapa E. coli O157:H7 i samplaí bia, beatha, uisce agus comhshaoil .
Coinníollacha Stórála Agus Dáta Éaga
Déan stóráil ag -20 ℃ sa dorchadas agus seachain reo agus leá arís agus arís eile.
Is é 12 an tréimhse bailíochtamhí, agus taispeántar an dáta táirgthe ar an bpacáistiú seachtrach.
Ionstraimí agus Inchaite
Uirlis chainníochtúil PCR fluaraiseacha, gunna pípéad agus leideanna meaitseála, croiteoir vortex, mionlártheifneoir.
Úsáid
1. Próiseáil Samplach
1.1 Cineál an tsampla: Tá an trealamh seo oiriúnach do bhia, do bheatha, do shamplaí uisce agus do shamplaí eile a bhfuil amhras orthu a bheith éillithe ag Escherichia coli O157:H7.Maidir le táirgí feola domhainphróiseáilte, deochanna agus substaintí eile ina bhfuil líocha, ní mór iad a rinsiú ionas nach ndéanfaidh siad difear do bhailiúchán comhartha fluaraiseachta.
1.2 Próiseáil samplach: Déan tagairt do "GB 4789.10-2016 Caighdeán Náisiúnta um Shábháilteacht Bia Scrúdú Micribhitheolaíochta Bia ar Escherichia coli O157: Tástáil H7" le haghaidh ullmhú samplach, cultúr saibhrithe agus leithlisiú Escherichia coli O157: H7.
- Neastóscadh aigéad úicileach
Glac 20 ml de thuaslagán saibhrithe i bhfeadán lártheifneoir 1.5 mL, cuir 200 μL de lysate miocróbach (tá trealamh breise ag teastáil), vortex ar feadh 30 soicind, lártheifneoir go hachomair, agus cuir ar leataobh.
Nótaí: Ba cheart eastóscadh aigéid núicléigh ón lysate a chríochnú laistigh de 10 nóiméad, agus ní féidir é a stóráil ar feadh i bhfad.
3. Aimpliú Aigéad Núicléach
3.1 Cas ar an ionstraim chainníochtúil PCR fluaraiseacha le húsáid.
Maolán A agus Maolán B as an trealamh , leá iad go maith, agus lártheifneoir go hachomair.Cuir 18 μL Maolán A agus 2 μL Maolán B le gach feadán imoibrithe PCR.Ansin cuir 5 mL gach ceann de na rialú diúltach, aigéad núicléach bhaintear, agus rialú dearfach isteach feadáin imoibrithe PCR, caipín na feadáin, agus lártheifneoir go hachomair.
3.3 Aistrigh an feadán imoibrithe PCR go meaisín fluaraiseacha PCR, agus bain úsáid as na nósanna imeachta seo a leanas chun turgnaimh aimpliúcháin a dhéanamh: roghnaigh 25 ml don chóras imoibrithe, bailigh comharthaí fluaraiseachta ag 60 ° C do gach timthriall, agus roghnaigh FAM don chainéal braite .
| Céim | Clár | Líon na dtimthriallta |
| 1 | 37 ℃ 5 nóiméad | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30s (bailigh fluaraiseacht) |
Treoracha le haghaidh anailíse fadhbanna saor in aisce,
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Ní féidir RNA ar bith a bhaint as nó tá táirgeacht aigéid núicléigh íseal
De ghnáth tá go leor fachtóirí ann a théann i bhfeidhm ar éifeachtúlacht aisghabhála, mar shampla: ábhar RNA samplach, modh oibríochta, toirt elution, etc..
Anailís ar chúiseanna coitianta:
Folctha 1.Ice nó lártheifneoiriú íseal-teocht (4 ° C) le linn oibriú.
Moladh: Oibriú teocht an tseomra (15-25 ° C), ní folcadán oighir riamh agus lártheifneoir teocht íseal.
2. Stóráil sampla míchuí nó stóráil samplach ar feadh ró-fhada.
Moladh: Stóráil samplaí ag -80 ° C nó reo i nítrigin leachtach, agus seachain úsáid reo-leá arís agus arís eile;déan iarracht samplaí úr-bhailithe a úsáid le haghaidh eastóscadh RNA.
3.Insufficient sampla lysis
Moladh: Cinntigh le do thoil go bhfuil an sampla agus an réiteach oibre (Aicriolaimíd Líneach) measctha go maith agus gortha ar feadh 10 nóiméad ag teocht an tseomra (15-25 ° C)
4.Cuireadh an eluent isteach go mícheart
Moladh: Déan cinnte go gcuirtear RNase-Free ddH2O le lár membrane an cholúin íonúcháin
Toirt 5.Improper eatánóil ainhidriúil i Maolán viRW2
Moladh: Lean na treoracha, le do thoil, cuir an toirt ceart eatánóil ainhidriúil le Buffer viRW2 agus measc go maith iad sula n-úsáideann tú an trealamh.
Úsáid sampla 6.Improper.
Moladh: 200 µl sampla in aghaidh 500μl de Maolán viRL.Mar thoradh ar líon iomarcach samplach laghdófar ráta eastósctha RNA.
Toirt elution 7.Improper nó elution neamhiomlán.
Moladh: Is é 30-50μl toirt eluent an cholúin íonúcháin;mura bhfuil an éifeacht elution sásúil, moltar ddH RNase-Free réamhthéite a chur leis2O agus an t-am a chur ag teocht an tseomra a leathnú, mar shampla 5-10min
Tá iarmhar eatánól ag colún 8.Purification tar éis sruthlú i Buffer viRW2.
Moladh: Má fhanann eatánól fós tar éis sruthlaithe i Buffer viRW2 agus lártheifneoiriú feadán folamh ar feadh 2 nóiméad, is féidir an colún íonúcháin a fhágáil ag teocht an tseomra ar feadh 5 nóiméad tar éis lártheifneoiriú feadáin folamh chun an eatánól atá fágtha a bhaint go hiomlán.
Díghrádú na móilíní RNA íonaithe
Baineann cáilíocht an RNA íonaithe le fachtóirí cosúil le stóráil samplach, éilliú RNase, agus oibriú.
Anailís ar chúiseanna coitianta:
1.Níor sábháladh na samplaí a bailíodh in am.
Moladh: Mura n-úsáidtear an sampla in am tar éis a bhailiú, le do thoil é a stóráil ag -80 ℃ nó nítrigine leachtach láithreach.Chun móilíní RNA a eastóscadh, déan iarracht samplaí úr-bhailithe a úsáid nuair is féidir.
Bhí samplaí 2.Collected reo agus leá arís agus arís eile.
Moladh: Seachain reo agus leá arís agus arís eile (gan níos mó ná uair amháin) le linn bailiúcháin agus stórála samplaí, nó laghdóidh táirgeacht aigéid núicléigh.
Tugadh 3.RNase isteach sa seomra oibriúcháin nó níor caitheadh aon lámhainní indiúscartha, maisc, etc.
Moladh: Is fearr an turgnamh ar mhóilíní RNA a eastóscadh i seomra oibríochta RNA ar leith, agus déantar an tábla turgnamhach a ghlanadh roimh an turgnamh.Caith lámhainní agus maisc indiúscartha le linn an turgnaimh chun díghrádú RNA de bharr tabhairt isteach RNase a sheachaint.
4.Tá an t-imoibrí éillithe ag RNase le linn úsáide.
Moladh: Fearas Leithlisithe RNA Víreasach nua a chur ina ionad le haghaidh turgnaimh ghaolmhara.
5. Éilliú RNase ar na feadáin lártheifneoir, leideanna pípéad, srl.
Chuir na móilíní RNA íonaithe isteach ar thurgnaimh iartheachtacha
Beidh tionchar ag na móilíní RNA arna n-íonú ag an gcolún íonúcháin ar thurgnaimh le sruth má tá an iomarca iain salainn nó próitéiní ann, mar shampla: trascríobh droim ar ais, Northern Blot, etc..
1.Tá iain salainn fágtha sna móilíní RNA eluted.
Moladh: Déan cinnte go bhfuil an méid ceart eatánóil ainhidriúil curtha le Buffer viRW2, agus nigh an colún íonú faoi dhó de réir an luas lártheifneoirithe ceart ar na treoracha oibriúcháin ；Má tá iain salainn fós ann, is féidir leat Buffer viRW2 a chur leis an gcolún íonúcháin, agus é a fhágáil ag teocht an tseomra ar feadh 5 nóiméad.Ansin déan lártheifneoiriú chun éilliú iain salainn a bhaint a mhéid is mó
2.Tá eatánól fágtha sna móilíní RNA eluted
Moladh: a luaithe a dheimhnítear go bhfuil na colúin íonúcháin sruthlaithe ag Buffer viRW2, déan lártheifneoiriú feadán folamh de réir an luas lártheifeacha ar na treoracha oibriúcháin.Má tá eatánól fós fágtha, is féidir é a fhágáil ar feadh 5 nóiméad ag teocht an tseomra tar éis lártheifneoiriú feadán folamh chun an t-eatánól atá fágtha a bhaint a mhéid is mó.
Lámhleabhair Treoraithe:
Lámhleabhar Trealamh Leithlisiú RNA víreasach
