Táimid tar éis taithí monaróir.An tromlach a bhuaigh i ndeimhnithe ríthábhachtacha a mhargaidh le haghaidh lascainiú Mór na Síne Ard-Íogaireacht Aon Chéim Probe Rt-QpcrKit V2, Is é Cáilíocht saol na monarchan, Fócas ar éileamh an chustaiméara is foinse marthanais agus forbartha na cuideachta, Cloíimid le macántacht agus dearcadh oibre de mheon macánta, ag tnúth le do theacht!
Táimid tar éis taithí monaróir.Bhuaigh an tromlach i ndeimhnithe ríthábhachtach a mhargadh le haghaidhPolaiméaráis DNA Taq tSín, Qpcr, Geallann ár gcuideachta: praghsanna réasúnta, am táirgthe gearr agus seirbhís iar-díola sásúil, cuirimid fáilte roimh duit cuairt a thabhairt ar ár n-mhonarcha ag am ar bith is mian leat.Is mian linn anois gnó taitneamhach fadtéarmach a bheith againn le chéile!!!

Cur síos

Úsáideann an trealamh seo córas maoláin lysis uathúil ar féidir leis RNA a scaoileadh go tapa ó shamplaí cille saothraithe le haghaidh imoibrithe RT-qPCR, rud a chuireann deireadh leis an bpróiseas íonú RNA atá am-íditheach agus atá go leor oibre.Is féidir an teimpléad RNA a fháil i díreach 7 nóiméad.Is féidir leis na himoibrithe 5 × Direct RT Mix agus 2 × Direct qPCR Mix-SYBR a sholáthraíonn an trealamh torthaí PCR cainníochtúla fíor-ama a fháil go tapa agus go héifeachtach.

Tá lamháltas láidir coscaire ag 5 × Direct RT Mix agus 2 × Direct qPCR Mix-SYBR, agus is féidir lysate na samplaí a úsáid mar theimpléad do RT-qPCR go díreach.Sa trealamh seo tá an trascríobh aisiompaithe Foregene ard-chleamhnas RNA uathúil, agus polaiméaráis Hot D-Taq DNA, dNTPs, MgCl₂, maolán imoibrithe, optimizer PCR agus cobhsaitheoir.

Sonraíochtaí

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Comhpháirteanna Kit

Gnéithe agus buntáistí

■ Simplí agus éifeachtach : le teicneolaíocht Cell Direct RT, is féidir samplaí RNA a fháil i díreach 7 nóiméad.

■ Tá an t-éileamh samplach beag, chomh híseal agus is féidir 10 gcealla a thástáil.

■ Tréchur ard: féadann sé RNA a bhrath go tapa i gcealla saothraithe i 384, 96, 24, 12, plátaí 6 thobair.

■ Is féidir le scriosán DNA géanóim scaoilte a bhaint go tapa, an tionchar ar thorthaí turgnamhacha ina dhiaidh sin a laghdú go mór.

■ Déanann córas optamaithe RT agus qPCR an trascríobh droim ar ais RT-PCR dhá chéim níos éifeachtaí agus PCR níos sainiúla, agus níos resistant d'inhibitors imoibriú RT-qPCR.

Feidhmchlár Kit

Scóip an iarratais: cealla saothraithe.

- RNA arna scaoileadh ag lysis samplach: infheidhme ach amháin maidir le teimpléad RT-qPCR den trealamh seo.

- Is féidir an trealamh a úsáid chun na críocha seo a leanas: anailís ar léiriú géine, fíorú éifeacht tosta géine trí mheán siRNA, scagadh drugaí, etc.

Léaráid

Stóráil agus Seilfré

Ba cheart Cuid I den trealamh seo a stóráil ag 4 ℃;Ba chóir Cuid II a stóráil ag -20 ℃.

Ba chóir Foregene Protease Plus II a stóráil ag 4 ℃, ná reoite ag -20 ℃.

Ba chóir imoibrí 2 × Direct qPCR Mix-SYBR a stóráil ag -20 ℃ sa dorchadas;má úsáidtear go minic é, is féidir é a stóráil freisin ag 4 ℃ le haghaidh stórála gearrthéarmach (úsáid laistigh de 10 lá). Táimid tar éis taithí monaróir.Bhuaigh an tromlach i ndeimhnithe ríthábhachtacha a mhargaidh le haghaidh lascainiú Mór na Síne Ard-Íogaireacht Aon Chéim Tóraigh Rt-Qpcr Kit V2, Is é cáilíocht saol na monarchan, Fócas ar éileamh an chustaiméara is foinse marthanais agus forbartha na cuideachta, Cloíimid le macántacht agus dearcadh oibre de mheon macánta, ag tnúth le do theacht!
Lascaine mhórPolaiméaráis DNA Taq tSín, Qpcr, Geallann ár gcuideachta: praghsanna réasúnta, am táirgthe gearr agus seirbhís iar-díola sásúil, cuirimid fáilte roimh duit cuairt a thabhairt ar ár n-mhonarcha ag am ar bith is mian leat.Is mian linn anois gnó taitneamhach fadtéarmach a bheith againn le chéile!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Taqman

Cat.No.DRT-01021/01022

Le haghaidh cille díreach RT-qPCR ag baint úsáide as ≤ 1000,000 cealla

Réamhrá táirge

Úsáideann an táirge seo córas maoláin lysis uathúil chun RNA a scaoileadh go tapa ó shamplaí cille saothraithe le haghaidh imoibrithe RT-qPCR, deireadh a chur leis an bpróiseas íonú RNA am-íditheach agus saothair, agus gan ach 7 nóiméad chun an teimpléad RNA riachtanach a fháil, leis an 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman a sholáthraíonn an trealamh is féidir torthaí fíor-ama PCR a fháil go tapa agus go héifeachtach.

Tá lamháltas láidir coscaire ag 5 × Direct RT Mix agus 2 × Direct qPCR Mix-Taqman agus is féidir leo aisiompú éifeachtach agus aimpliú sonrach a dhéanamh trí úsáid a bhaint as lysate an tsampla atá le tomhas mar theimpléad.San imoibrí tá Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂, Maolán Imoibrithe, PCR Optimizer agus Cobhsaitheoir, is féidir a úsáid le maolán lysis chun samplaí a bhrath go tapa agus go héasca, agus tá tréithe ard-íogaireacht, sainiúlacht agus cobhsaíocht aige.

Gnéithe Táirge

Teicneolaíocht simplí, éifeachtach Cell Direct RT a thógann chomh beag le 7 nóiméad chun samplaí RNA a fháil.

Tá riachtanais shamplacha beag, agus is féidir 10 gcill saothraithe ar a laghad a úsáid le haghaidh turgnamh.

Tréchur ard le haghaidh éadáil tapa RNA de chealla saothraithe ar nós plátaí 384, 96, 24, 12, agus 6-tobar.

Tá DNA Léirscriosán in ann a bhaint go tapa genomes scaoileadh, ag laghdú go mór an tionchar ar thorthaí turgnamhacha ina dhiaidh sin.

Cumasaíonn córais optamaithe RT agus qPCR RT-PCR dhá chéim le trascríobh droim ar ais níos éifeachtaí, sainiúlacht, agus caoinfhulaingt coscaire imoibrithe RT-qPCR níos láidre.

Feidhmchlár Kit

Scóip an iarratais: Cealla saothraithe.

RNA samplach léirmhínithe lysis: ní úsáidtear é ach mar theimpléad RT-qPCR dhá chéim.

Is féidir trealamh a úsáid chun na críocha seo a leanas: anailís ar léiriú rialála géine, tástáil ailléil, scagadh drugaí, etc.

Teorainneacha Kit

Blúirí aimplithe ≤ 300 bp.

Úsáidtear feisteáin chun cealla a chothú as an nua.

Rialú cáilíochta táirge

De réir Chóras Bainistíochta Cáilíochta Iomlán FOREGENE, déantar tástáil dhian ar gach baisc d'fheisteáin sraith Cell Direct RT-qPCR iolrach chun iontaofacht agus cobhsaíocht cháilíocht gach baisc feisteáin a chinntiú.

Ábhar an trealaimh

*:Is féidir Cell Lysis, 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman a cheannach ar leithligh, tá sonraí curtha ar fáil in Aguisín 1 (Leathanach 13).

Coinníollacha stórála

1. Coinníollacha Loingseoireachta

An próiseas iomlán iompair bosca pacáiste oighir ag teocht íseal, chun a chinntiú go bhfuil an trealamh sa stát <4 °C.

2. Coinníollacha stórála

Stóráil Cuid I ag 4°C agus Cuid II ag -20°C.

Ba chóir an Foregene Protease Plus II a stóráil ag 4 ° C, gan reoite ag -20 ° C.

Stóráiltear imoibrí 2 × Direct qPCR Mix-Taqman ag -20 ° C, nó ag 4 ° C le haghaidh úsáid ghearrthéarmach má úsáidtear é go minic (laistigh de 10 lá).

Faisnéis faoi chomhpháirt Kit

Maolán CL: Soláthraíonn sé an timpeallacht a theastaíonn le haghaidh imoibrithe lysis cille.

Maolán ST: Foirceannann sé an tsubstaint ghníomhach sa lysate chun éifeachtaí ar RT ina dhiaidh sin a sheachaint.

Scriosán DNA: remover DNA, an éifeacht a bhaint as an genome ar thurgnaimh ina dhiaidh sin.

5 × Meascán RT Díreach: Tá ard-chleamhnas RNA Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, dNTPs, cobhsaitheoirí, feabhsaitheoirí, optamaithe, agus primers trascríobh droim ar ais le haghaidh ailíniú optamach (Random Primer, Oligo(dT))₁₈primer).

Foregene Protease Plus II: I gcomhthéacs maolán lysis, déantar cealla a liostáil chun aigéid núicléacha a scaoileadh.

2× Direct qPCR Mix-Taqman: Tá Polymerase DNA Hot D-Taq, dNTPs, MgCl san imoibrí seo₂, maolán imoibrithe, optimizer PCR, agus cobhsaitheoir.

Dath Tagartha 20 × ROX: Úsáidtear go ginearálta é ar ionstraimí aimplithe PCR Fíor-ama ABI, Stratagene agus cuideachtaí eile, úsáidtear é chun an difríocht idir feadáin PCR agus feadáin de bharr earráidí dosála PCR a choigeartú.Tá an tiúchan lí tagartha 20 × ROX atá ag teastáil le haghaidh ionstraimí éagsúla difriúil, agus is féidir leis an úsáideoir é a chur leis de réir tiúchan molta na hionstraime.

RNase-DDH saor in aisce₂O: uisce ultra íon steiriliú saor ó RNase le haghaidh imoibrithe RT-qPCR dhá chéim.

Réamhchúraimí:(Bí cinnte go léann tú na réamhchúraimí go cúramach sula n-úsáideann tú an trealamh)

Tabhair aird ar mhodh oibríochta an turgnaimh chun tras-éilliú a sheachaint idir samplaí.

Tabhair aird ar ghlaineacht na timpeallachta turgnamhacha agus uirlisí chun éilliú RNase agus díghrádú RNA a sheachaint.

Tóg samplaí cille úra nó dea-chaomhnaithe agus ná húsáid samplaí cille reo-leáite arís agus arís eile riamh.

Ba chóir go seachnódh 5 × Direct qPCR Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman reo-leá arís agus arís eile, nó beidh tionchar aige ar thrascríobh droim ar ais agus ar éifeachtúlacht PCR.

Ullmhaighciondálacharoimhoibríocht

Bí cinnte na treoracha a léamh go cúramach sula n-úsáideann tú an trealamh seo.Tá an Kit RT-qPCR Cell Direct simplí, áisiúil, agus tapa le feidhmiú, agus soláthraíonn na treoracha faisnéis iomlán faoin trealamh iomlán agus conas é a úsáid i gceart.Ullmhaigh na hábhair turgnamhacha agus an trealamh riachtanach roimh úsáid.

Ábhair agus trealamh turgnamhacha

◆ Cealla cultúir.

◆ 1.5 ml nó 2 ml, feadán lártheifneoir RNase-/DNase-Free, tip RNase-/DNase-Free, feadán qPCR steiriúil 0.2 ml.

◆ meaisín qPCR, pípéad, lártheifneoir boird (≥13,400×g) (ag brath ar riachtanais thurgnamhach), etc.

Sábháilteacht

◆ Tá an táirge seo chun críocha taighde eolaíoch amháin, le do thoil ná húsáid chun críocha cógaisíochta, cliniciúla, bia agus cosmaideacha.

◆ Nuair a bhíonn ceimiceáin á úsáid agat, caith éadaí saotharlainne cuí, lámhainní, gloiní cosanta, etc.

Oibríochttreoracha

Is féidir córais Cell Lysis, córais RT, agus pacáistí forlíonta réitigh imoibrithe qPCR a cheannach ar leithligh, le haghaidh sonraí in Aguisín 1 (Leathanach 13).

Treoir oibriúcháin

A: Sampla scaoileadh RNA

1.Cells were pretreated: Nigh an pláta cultúir cille le PBS fuar, ansin lyse na cealla (10-10⁶), 10⁶ ná méid na gceall, moltar Foregene the Cell agus Kit Leithlisiú RNA an Iomlán (DE-03111) nó Kit Leithlisiú RNA Iomlán Ainmhithe (DE-03011) le haghaidh eastóscadh agus íonú RNA.

1.1.Cealla greamaitheacha (pláta 24 tobar mar shampla)

1.1.1.Déan líon na gcealla i ngach tobar a chinneadh, cinntigh gurb é 1 × 10 líon na gcealla⁵, agus pípéad a úsáid chun an meán cultúir a bhaint as an mhias cultúir.

1.1.2.Cuir 200 μl de 1 × PBS réamhfhuaraithe le gach tobar.Ná píopaí arís agus arís eile agus bain PBS as na toibreacha.Tilt an pláta agus bain an oiread PBS agus is féidir.Lean ar aghaidh go dtí céim 2.

1.1.3.Cuireadh mias saothraithe cille difriúil nó tábla uimhir thagartha 1-1 i mias cultúr cille réamhfhuaraithe 1 × PBS le haghaidh níocháin cille.

Tábla 1-1: Dáileog PBS le haghaidh líon éagsúil cealla

Nóta:Chun a chinntiú go daingean cealla cloí,seachnaítear líon mór caillteanas cille agus iad ag níocháin.

1.2.Cealla fionraí nó cealla greamaitheacha saothraithe i plátaí neamh-porous

1.2.1.Cealla greamaitheacha saothraithe i plátaí tobair neamh-il (tosaíonn cealla fionraí ón gcéad chéim eile 1.2.2), a bhailiú agus a scaradh na cealla de réir an modh bailithe cille gnáth, agus iad a chur i pláta cultúir nó feadán lártheifneoir;má úsáidtear trypsinization, teastaíonn lártheifneoiriú chun na cealla a bhailiú agus chun trypsin iarmharach a bhaint, cuir cealla athshocraithe PBS isteach i gcealla aonair chun na cealla a scaipeadh.

1.2.2.Tar éis líon na gcealla a chomhaireamh, cealla a leithdháileadh 1×10⁵ feadáin amháin go lártheifneoir, cealla a bhailiú trí lártheifneoiriú ag 1000 × g ar feadh 10 nóiméad.

1.2.3.Cuir 200 μl PBS leis an bhfeadán lártheifneoir, ná píp arís agus arís eile, agus déan an PBS a asú go díreach.ar aghaidh go dtí céim 2. (Má tá sé deacair deascadh agus na cealla a chur ar fionraí arís, féadfar é a dhéanamh 1000 × g lártheifneoirithe 10 nóiméad tar éis an comhshó a chaitheamh amach, téigh an millín cille ar aghaidh go céim 2)

2.Cell lysis: Bain Buffer CL, a theocht cothromaithe go teocht an tseomra, DNA Eraser agus Foregene Protease Plus II, de réir an tábla seo a leanas 1-2 córas lysis ullmhaithe: (Tá réiteach Lysis réidh le húsáid).

Tábla 1-2: scoilteacht ullmhú córais (Nóta: san ullmhúchán ar oighear)

3.(24 –pláta tobair mar shampla) Pípéad 200 µl de mheascán máistir lysis cille isteach i ngach tobar, Séid arís agus arís eile 5-10 uair, Goir ag teocht an tseomra (20-25 ℃) ar feadh 5 nóiméad.

Nóta:Chun foirmiú boilgeoga a sheachaint, le do thoil nuair a choigeartaíodh scála pípéad pípéad go 200μl nó níos lú.Féadfaidh na cealla a bheith le feiceáil scamallach tar éis lysis, rud atá gnáth.

Cuirtear 4.(24 –pláta tobair mar shampla) isteach sa leacht 20 μl Maolán ST (córais lysis éagsúla Maolán ST curtha leis an méid a thaispeántar i dTábla 1-3) , píbeáil arís agus arís eile 5-10 uair, ag teocht an tseomra (20-25 ℃ ) goradh ar feadh 2 nóiméad .

Nóta:Dhiúscair an tip pípéad faoin dromchla, ag cinntiú gur cuireadh an lysate leis,chun foirmiú boilgeoga a sheachaint, le do thoil nuair a choigeartaíodh scála pípéad pípéad go 200μl nó níos lú.

Tábla 1-3:Cuir Maolán ST leis

5. Úsáidtear an lysate le haghaidh turgnaimh RT-qPCR ina dhiaidh sin.Mura féidir na turgnaimh ina dhiaidh sin a dhéanamh in am, le do thoil é a choinneáil ar oighear ar feadh níos mó ná 2 uair, agus a stóráil ag -20 ℃ nó -80 ℃ (gan níos mó ná trí mhí).

B: ullmhúchán córais RT

1.Tóg amach 5 × Direct RT Mix agus é a chur ar folctha oighir, lig dó leá go nádúrtha, agus é a mheascadh go réidh le húsáid níos déanaí;tóg amach ddH2O saor ó RNase agus leá é agus cuir ar folctha oighir é le húsáid níos déanaí.Ullmhaigh an córas imoibrithe ar oighear de réir Tábla 2-1 thíos.

Tábla 2-1: Córas imoibrithe RT a ullmhú

2.Tar éis críochnú foirmiú an chórais, measctha go réidh agus lártheifneoirithe go hachomair sa tábla seo a leanas 2 -2 coinníollacha imoibriúcháin imoibriú RT.

Tábla 2-2: Socrú riocht imoibrithe RT

3. Tar éis an t-imoibriú a chríochnú, cuireadh an táirge imoibrithe go díreach ar oighear le haghaidh qPCR , cuir an caomhnú fadtéarmach -20 ℃ nó -80 ℃ .

Nóta: Mar gheall ar theimpléad neamh-íonaithe a úsáid, féadfaidh deascán bán a bheith le feiceáil sa táirge trascríobh droim ar ais.Is gnáth-feiniméan é seo.Lártheifneoir an ollnóva láithreach le haghaidh turgnaimh ina dhiaidh sin.

Cuirtear an réiteach imoibrithe RT mar thoradh air sin leis na córais imoibrithe PCR Real Time seo chugainn, moltar méideanna idir 10-30% den chóras imoibrithe a chur leis.

C: ullmhú córas imoibrithe qPCR

1.Méid cuí B ullmhaithe i dteimpléad cDNA chéim de réir an tábla seo a leanas 3-1 chun córas imoibrithe a ullmhú.

Nóta: Is ionann méid an teimpléid cDNA agus 10-30% den chóras qPCR.Mar shampla, i gcóras qPCR 20μl, cuir 2-6 μl de mhaolán lysis, ach nach mó ná 6 μl.

2.An leas iomlán a bhaint as coinníollacha qPCR maith (teocht Annealing, etc.) le haghaidh imoibriú qPCR (Na coinníollacha imoibriúcháin tugtha ag Tábla 3-2).

Nóta: Déan iarracht coinníollacha optamaithe a úsáid le haghaidh imoibrithe qPCR chun torthaí níos fearr a fháil.

Tábla 3-1: Córas imoibrithe PCR a ullmhú

1*: Is féidir tiúchan primer a choigeartú sa raon 50-900 nM nuair a bhíonn feidhmíocht imoibriú primer lag.

Nóta: Is féidir an córas qPCR a choigeartú de réir riachtanais turgnamhacha agus múnla timthriallta fluaraiseachta.Le haghaidh qPCR i 50μl córas, coigeartaigh an dáileog imoibrí go comhréireach de réir an 20μl córas.

2*: Roghnaigh an tiúchan deiridh cuí de ROX Reference Dye de réir an timthriallora teirmeach cainníochtúil fhluaraiseachta.Taispeántar sa tábla thíos na tiúchain ROX Reference Dye is oiriúnaí do thimthriallta cainníochtúla coitianta fluaraiseachta:

Tábla 3-2: soláthraítear coinníollacha imoibrithe qPCR

Nóta: Chun an éifeacht qPCR is fearr a fháil, is féidir PCR grádán a úsáid chun na coinníollacha imoibrithe a bharrfheabhsú le haghaidh teimpléid éagsúla agus primers éagsúla.Athraíonn coinníollacha imoibrithe PCR ag brath ar an anailísí fluaraiseachta, teimpléad, primer, etc. San oibríocht shonrach, is gá na coinníollacha imoibrithe is fearr a dhearadh de réir coinníollacha sonracha an timthriallora teirmeach cainníochtúil fluaraiseachta, cineál teimpléid, méid an bhlúire spéise, seicheamh bonn na blúire aimplithe agus ábhar GC agus fad na primers, lena n-áirítear teocht annealing, am imoibrithe, etc.

Prionsabail deartha fíor-ama PCR primer

Ar Aghaidh Primer agus Droim ar ais Primer

Maidir le PCR Fíor-ama, tá dearadh primer an-tábhachtach.Tá baint ag primers le sainiúlacht agus le héifeachtúlacht an aimplithe PCR, agus is féidir iad a dhearadh ag tagairt do na prionsabail seo a leanas:

◆ Fad primer: 18-30bp.

◆ Ábhar GC: 40-60%.

◆ Luach Tm: Is féidir le bogearraí deartha primer, mar shampla Primer 5, luach Tm an primer a thabhairt.Ba cheart go mbeadh luachanna Tm na bpriméirí in aghaidh an tsrutha agus iartheachtach chomh gar agus is féidir.Is féidir an fhoirmle ríomh Tm a úsáid freisin: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nuair a bhíonn PCR á fheidhmiú, roghnaítear teocht faoi bhun luach an primer Tm de 5 °C mar an teocht anáil (is féidir leis an méadú comhfhreagrach ar an teocht annealaithe sainiúlacht an imoibrithe PCR a mhéadú).

◆ Primers agus táirgí PCR:

◆ Dearadh primer PCR fad táirge aimpliú is fearr 100-150bp.

◆ Ba cheart primers dearaidh i limistéar struchtúrach tánaisteach an teimpléid a sheachaint a oiread agus is féidir.

◆ Seachain foirmiú 2 bhonn chomhlántacha nó níos mó idir na 3′ foirceann de phriméirí in aghaidh an tsrutha agus iartheachtacha.

Ní féidir le bonn teirminéil ◆ Primer 3′ a bheith i láthair le 3 G nó C breise i ndiaidh a chéile.

◆ Ní féidir struchtúir chomhlántacha a bheith ag na primers féin, nó cruthófar struchtúr hairpin, rud a chuireann isteach ar aimpliú PCR.

◆ Ba cheart ATCG a dháileadh chomh cothrom agus is féidir sa seicheamh primer, agus ba cheart an bonn teirminéil 3′ a sheachaint mar T.

Aguisín1:Cell DíreachRT-qPCR Comhpháirt Kitt pacáiste forlíonta

Réiteach Lysis 1.Cell