Steiriliú leideanna pípéad agus feadáin EP, etc.
1. Ullmhaigh 0.1% (aon mhíle) DEPC (substaint an-tocsaineach) le huisce dí-ianaithe, bain úsáid as go cúramach i gcochall múiche é, agus é a stóráil ag 4 ° C ar shiúl ón solas;
Is uisce íon é uisce DEPC a chóireáiltear le DEPC agus a steiriliú ag teocht ard agus brú ard.Tástáilte le bheith saor ó RNase, DNase agus proteinase.
2. Cuir an tip pípéad agus an feadán EP isteach i 0.1% DEPC, agus cinntigh go bhfuil an tip pípéad agus an feadán EP líonta le 0.1% DEP.
3. Cosain ó solas, lig seasamh, thar oíche (12-24h)
4. Ní gá an bosca ina bhfuil an rinn agus an feadán EP a bheith sáithithe i DEPC.Tar éis an t-uisce DEPC a bhaint go garbh sa rinn nó sa fheadán EP, pacáil suas é agus fillte suas é.
5. 121 céim Celsius, 30min
6. 180 céim Celsius, tirim ar feadh roinnt uaireanta (ar a laghad 3 uair an chloig)
Nóta: a.Caith lámhainní agus maisc laitéis agus DEPC á láimhseáil agat!b, nó gan steiriliú DEPC, 130 ℃, autoclave 90min (steiriliú teocht ard go leor saotharlanna faoi dhó)
Breithnithe eastósctha RNA
Dhá feiniméin mhór de teip aonrú RNA fíocháin
Díghrádú RNA agus iarmhair eisíontais i bhfíocháin,maidir le díghrádú, déanaimis féachaint ar dtús cén fáth nach bhfuil RNA a bhaintear as cealla saothraithe díghrádaithe go héasca.Tá comhpháirteanna go léir a chuireann bac gasta ar RNase sna himoibrithe eastósctha RNA atá ann cheana féin.Cuir an lysate leis na cealla saothraithe, agus go simplí é a mheascadh, is féidir na cealla go léir a mheascadh go críochnúil leis an lysate, agus tá na cealla lysed go hiomlán.Tar éis na cealla a lysed, cuireann na comhábhair ghníomhacha sa lysate bac láithreach ar an RNase intracellular, agus mar sin fanann an RNA slán.Is é sin le rá, toisc go bhfuil na cealla saothraithe i dteagmháil go héasca agus go hiomlán leis an lysate, ní dhéantar a RNA a dhíghrádú go héasca;ar an láimh eile, tá an RNA sa fhíochán díghrádaithe go héasca toisc nach bhfuil na cealla sa fhíochán éasca teagmháil a dhéanamh go tapa leis an lysate.mar gheall ar theagmháil leordhóthanach.Mar sin,ag glacadh leis go bhfuil bealach ann chun an fíochán a iompú ina chill amháin agus bac ar ghníomhaíocht RNA, d'fhéadfaí fadhb an díghrádaithe a réiteach go hiomlán.
Is é muilleoireacht nítrigine leachtach an modh is éifeachtaí dá leithéid.Mar sin féin, tá an modh muilleoireachta nítrigine leachtach an-trioblóideach, go háirithe nuair a bhíonn líon na samplaí mór.Ba chúis leis seo an chéad rud eile ab fhearr: an homogenizer.Tá anhomogenizerNí mheasann an modh seo an cheist maidir le conas a chuirtear bac ar ghníomhaíocht RNase sula ndéantar teagmháil leis na cealla leis an lysate, ach guíonn sé go bhfuil an ráta briseadh fíocháin níos tapúla ná an ráta a dhíghrádaíonn RNase incheallach RN.
Is fearr an éifeacht homogenizer leictreach,agus tá an éifeacht homogenizer gloine bocht, ach go ginearálta, ní féidir leis an modh homogenizer cosc a chur ar an bhfeiniméan díghrádaithe.Dá bhrí sin, má tá an t-eastóscadh díghrádaithe, ba cheart an homogenizer leictreach bunaidh a úsáid le haghaidh meilt le nítrigin leachtach;ba cheart an homogenizer gloine bunaidh a athrú go homogenizer leictreach nó a mheilt go díreach le nítrigin leachtach.Tá an fhadhb beagnach 100% indéanta.réiteach a fháil.
Tá cúiseanna níos éagsúla ná díghrádú ag an bhfadhb iarmhar eisíontais a dhéanann difear do thurgnaimh ina dhiaidh sin, agus tá na réitigh difriúil dá réir.I gcrích,má tá díghrádú nó neamhíonachtaí iarmharacha san fhíochán, ní mór an modh eastósctha/imoibrí don ábhar turgnamhach sonrach a bharrfheabhsú.Ní chaithfidh tú do shamplaí luachmhara a úsáid le haghaidh barrfheabhsú: is féidir leat roinnt ainmhithe beaga cosúil le héisc/sicín a cheannach ón margadh, an chuid comhfhreagrach den ábhar le haghaidh eastóscadh RNA a ghlacadh, agus an chuid eile d’eastóscadh próitéine – meileann leis an mbéal, leis an mbolg agus leis an inní Sliocht.
Úsáidtear sprioc RNA an RNA a bhaintear le haghaidh turgnaimh leantacha éagsúla, agus tá a riachtanais cháilíochta difriúil
Éilíonn tógáil leabharlainne cDNA sláine RNA gan iarmhair coscairí imoibrithe einsíme;Éilíonn an Tuaisceart sláine RNA níos airde agus ceanglais níos ísle maidir le hiarmhair coscairí imoibriúcháin einsíme;Ní éilíonn RT-PCR sláine RNA ró-ard,ach inhibits imoibrithe einsíme.Tá riachtanais iarmhar dian.Cinneann an t-ionchur an t-aschur;gach uair a bhfuil an sprioc a fháil ar an RNA íonachta is airde, beidh sé costas na daoine agus airgead.
Bailiú/Stóráil Samplaí
Tosca a Bhaineann le Díghrádú Tar éis don sampla an corp beo/nó an timpeallacht fáis bhunaidh a fhágáil, tosóidh na heinsímí ingineacha sa sampla ag díghrádú RNA,agus tá an ráta díghrádaithe bainteach le hábhar na n-einsímí endogenous agus teocht.Go traidisiúnta, níl ach dhá bhealach ann chun gníomhaíocht einsímeach endogenous a chosc go hiomlán: cuir lysate láithreach agus homogenize go críochnúil agus go tapa;gearrtha i bpíosaí beaga agus reo láithreach i nítrigine leachtach.Éilíonn an dá chur chuige oibriú tapa.Tá an dara ceann oiriúnach do gach sampla, agus níl an dara ceann oiriúnach ach amháin le haghaidh fíocháin a bhfuil cion íseal cealla agus einsímí ingenous agus níos éasca a homogenize.Go sonrach, is fearr fíochán plandaí, ae, thymus, briseán, spleen, inchinn, saille, fíochán muscle, etc. a reoite le nítrigin leachtach sula dtéann sé ar aghaidh.
Ilroinnt agus homogenization samplaí
Fachtóirí a mbíonn Tionchar acu ar Dhíghrádú agus ar Thoradh Is éard atá i ilroinnt na samplaíle haghaidh homogenization críochnúil, atá le scaoileadh iomlán agus iomlán RNA.Is féidir cealla a homogenized go díreach gan a bheith briste.Ní féidir fíocháin a homogenized ach amháin tar éis a bheith briste.Ní mór giosta agus baictéir a bhriseadh le heinsímí comhfhreagracha sular féidir iad a homogenized.Is féidir le fíocháin a bhfuil cion einsímí ingenous níos ísle agus homogenization níos éasca a bhrú agus homogenized ag aon am amháin sa lysate ag homogenizer;fíochán plandaí, ae, thymus, briseán, spleen, inchinn, saill, fíochán matáin agus samplaí eile, Tá siad ard i einsímí endogenous nó nach bhfuil go héasca homogenized,mar sin ní mór cur isteach fíocháin agus homogenization a dhéanamh ar leithligh.Is é an modh ilroinnte is iontaofa agus is táirgiúla ná muilleoireacht le nítrigin leachtach, agus is é an modh homogenization is iontaofa ná úsáid homogenizer leictreach.Nóta speisialta maidir le muilleoireacht le nítrigin leachtach: níor cheart an sampla a leá le linn an phróisis mhuilleoireachta ar fad, toisc gur mó an seans go bhfeidhmeoidh einsímí ingenous nuair a reoitear iad.
Rogha lysate
A théann i bhfeidhm ar áisiúlacht na hoibríochta agus fachtóirí na n-eisíontas ingenous iarmharach Is féidir leis na réitigh lysis a úsáidtear go coitianta bac a chur ar ghníomhaíocht RNase beagnach.Dá bhrí sin, is é an príomhphointe a bhaineann le réiteach lysis a roghnú a mheas i gcomhcheangal leis an modh íonú.Tá eisceacht amháin ann:moltar samplaí a bhfuil ard-ábhar einsímí endogenous acu úsáid a bhaint as lysate ina bhfuil feanól chun an cumas einsímí ingenous a dhíghníomhachtú a mhéadú.
Rogha modh íonú
Fachtóirí a théann i bhfeidhm ar neamhíonachtaí endogenous iarmharacha, luas eastósctha I gcás samplaí glan cosúil le cealla, is féidir torthaí sásúla a fháil le beagnach aon mhodh íonúcháin ar láimh.Ach i gcás go leor samplaí eile, go háirithe iad siúd a bhfuil leibhéil arda eisíontais acu mar phlandaí, ae, baictéir, etc., tá sé ríthábhachtach modh íonú oiriúnach a roghnú.Tá luas tapa eastósctha ag an modh íonú lártheifeacha colún agus féadann sé eisíontais a chuireann isteach ar imoibriú einsímeach RNA ina dhiaidh sin a bhaint go héifeachtach, ach tá sé costasach (is féidir le Foregene feisteáin atá éifeachtach ó thaobh costais a thairiscint, tuilleadh sonraí cliceáilanseo);is féidir úsáid a bhaint as modhanna íonú eacnamaíoch agus clasaiceach, mar shampla deascadh LiCl, torthaí sásúla a fháil freisin, ach tá an t-am oibríochta fada..
“Trí Disciplín agus Ocht nAire” le haghaidh Eastóscadh RNA
Disciplín 1:Cuir deireadh le héilliú einsímí eisghineacha.
Nóta 1:Caith go docht maisc agus lámhainní.
Nóta 2:Ba cheart na feadáin lártheifneora, na cinn Leid, na slata pípéad, na n-umair leictreafóiréis, agus na binsí turgnamhacha a bhí páirteach sa turgnamh a dhiúscairt go críochnúil.
Nóta 3:Caithfidh na himoibrithe/tuaslagáin a bhaineann leis an turgnamh, go háirithe uisce, a bheith saor ó RNase.
Disciplín 2:Cuir bac ar ghníomhaíocht na n-einsímí ingenous
Nóta 4:Roghnaigh modh homogenization cuí.
Nóta 5:Roghnaigh lysate cuí.
Nóta 6:Rialú méid tosaigh an tsampla.
Disciplín 3:Soiléirigh do chuspóir eastósctha
Nóta 7:Agus aon chóras lysate ag druidim le huasmhéid tosaigh an tsampla, titeann ráta ratha an eastósctha go mór.
Nóta 8:Is é an t-aon chritéar eacnamaíoch le haghaidh eastóscadh RNA rathúil ná rath i dturgnaimh ina dhiaidh sin, ní toradh.
Na 10 bhFoinse is Fearr d'Éilliú RNase
1. Is iad na méara an chéad fhoinse einsímí exogenous, mar sin ní mór lámhainní a chaitheamh agus a athsholáthar go minic.Ina theannta sin, ní mór maisc a chaitheamh freisin, toisc gur foinse thábhachtach einsímí é análaithe freisin.Buntáiste breise a bhaineann le masc lámhainní a chaitheamh ná an turgnamh a chosaint.
2. Leideanna píbéad, feadáin lártheifneora, pípéid – ní féidir RNase a dhíghníomhachtú trí steiriliú amháin, mar sin ba chóir leideanna pípéad agus feadáin lártheifneora a chóireáil le DEPC, fiú má tá siad marcáilte mar DEPC cóireáilte.Is fearr pípéad sainchuspóra a úsáid, é a wipe le liathróid cadáis alcóil 75% roimh úsáid, go háirithe an tslat;ina theannta sin, a bheith cinnte gan úsáid a bhaint as remover ceann.
3. Caithfidh an t-uisce/maolán a bheith saor ó éilliú RNase.
4. Ar a laghad, ba chóir an tábla tástála a ghlanadh le liathróidí cadáis alcóil 75%.
RNase 5.Edogenous Tá einsímí endogenous i ngach fíocháin, mar sin is é reo tapa fíocháin le nítrigin leachtach an bealach is fearr chun díghrádú a laghdú.Is deacair an modh stórála/meilt nítrigine leachtach go deimhin, ach is é an t-aon bhealach atá ann le haghaidh fíocháin a bhfuil leibhéil arda einsímí ingenous acu.
6. Samplaí RNA Féadfaidh rianta d'éilliú RNase a bheith i dtáirgí eastósctha RNA.
7. Eastóscadh plasma Is minic a úsáideann eastóscadh plasmid Rnase chun RNA a dhíghrádú, agus ba cheart an Rnase iarmharach a dhíleá le Proteinase K agus a bhaint as PCI.
8. Stóráil RNA Fiú má tá sé stóráilte ag teocht íseal, beidh méideanna rian de RNase ina chúis le díghrádú RNA.Is é an réiteach is fearr chun RNA a chaomhnú go fadtéarmach ná fionraí salainn/alcóil, toisc go gcuireann alcól bac ar gach gníomhaíocht einsímeach ag teochtaí ísle.
9. Nuair a bhíonn na hiain seo ag cations (Ca, Mg), cuirfidh téamh ag 80C ar feadh 5 nóiméad faoi deara RNA a scoilteadh, mar sin más gá RNA a théamh, caithfidh gníomhaire chelating (1mM Sóidiam chiotráite, pH 6.4) a bheith sa réiteach caomhnaithe.
10. D'fhéadfadh einsímí a úsáidtear i dturgnaimh ina dhiaidh sin a bheith éillithe le RNase.
10 Leideanna le haghaidh Eastóscadh RNA
1: Cosc go tapa ar ghníomhaíocht RNase.Déantar samplaí a reoite go tapa tar éis bailithe, agus díghníomhaítear RNase trí oibriú tapa le linn lysis.
2: Roghnaigh modh eastóscadh cuí le haghaidh fíocháin a bhfuil ábhar ard ribozyme ann, agus is fearr fíochán adipose an modh ina bhfuil feanól a úsáid.
3: Éilíonn cáilíocht tuartha an Tuaiscirt, éilíonn tógáil leabharlainne cDNA sláine ard, agus ní gá sláine ard a bheith ag RT-PCR agus RPA (measúnacht cosanta Ribonuclease).Éilíonn RT-PCR ardíonacht (iarmhair inhibitor einsím).
4: Is é homogenization críochnúil an eochair chun toradh a fheabhsú agus díghrádú a laghdú.
5: Seiceáil sláine braite leictreafóiréis RNA, tá 28S: 18S = 2: 1 ina chomhartha iomlán, tá 1: 1 inghlactha freisin don chuid is mó de thurgnaimh.
6: DNA a bhaint le haghaidh RT-PCR, anailís eagar Is fearr Dnase I a úsáid chun DNA a bhaint.
7: Laghdaigh éilliú einsímí eisghineacha – ní féidir einsímí a allmhairiú ón taobh amuigh.
8: Nuair a bhíonn aigéad núicléach íseal-tiúchan á díriú, ba cheart imoibrí comh-deascadh a chur leis.Ach chun cosc a chur ar an comh-precipitant ina bhfuil einsímí agus éilliú DNA.
9: Déan an RNA a dhíscaoileadh go críochnúil, más gá, teas ag 65C ar feadh 5 nóiméad.
modh stórála oiriúnach
Is féidir é a stóráil ag -20C ar feadh tamaill ghearr, agus ag -80C ar feadh i bhfad.Is é an chéad chéim chun torthaí RNA a fheabhsú ná a thuiscint go bhfuil éagsúlacht mhór ag baint le hábhar RNA samplaí éagsúla.Flúirse ard (2-4ug/mg) mar ae, briseán, croí, flúirse meánach (0.05-2ug/mg) mar inchinn, suth, duáin, scamhóg, thymus, ubhagán, flúirse íseal (<0.05ug/mg) mg) mar lamhnán, cnámh, saill.
1: Cealla lyse chun RN a scaoileadh - mura scaoiltear RNA, laghdófar an toradh.Oibríonn homogenization leictreachais níos fearr ná modhanna homogenization eile, ach d’fhéadfadh go mbeadh gá é a chomhcheangal le modhanna eile, mar shampla mashing nítrigine leachtach, díleá einsímeach (Lysozyme / Lyticase)
2: leas iomlán a bhaint as an modh eastósctha.Is iad na fadhbanna is mó le modhanna feanól-bhunaithe ná srathú neamhiomlán agus caillteanas páirteach RNA (ní féidir an súthach a bhaint go hiomlán).Tá srathú neamhiomlán mar gheall ar ard-ábhar aigéad núicléach agus próitéin, is féidir a réiteach trí mhéadú ar an méid lysate a úsáidtear nó laghdú ar an méid sampla.Cuireadh céim d'eastóscadh clóraform leis an bhfíochán saille.Is féidir caillteanas RNA a laghdú trí chúlchaidéalú nó tríd an gciseal orgánach a bhaint agus lártheifneoiriú ina dhiaidh sin.Is í an fhadhb is mó le modhanna bunaithe ar lártheifneoiriú colúin ná an iomarca sampla.
Leideanna Eastóscadh Clasaiceach
1. Íonú feanól: Cuir leis an toirt chéanna 1:1 Feanól/Clóraform agus measc go bríomhar ar feadh 1-2 nóiméad.Lártheifneoir ar luas ard ar feadh 2 nóiméad.Go cúramach bain an supernatant (80-90%).Ná téigh go dtí an ciseal lár.Is féidir toirt chomhionann den tuaslagán imoibriúcháin a chur le Feanól/Clóraform agus an comhshnáthán a bhaint.Is féidir an dá sháithíní a mheascadh le chéile le haghaidh deascadh aigéid núicléigh chun an táirgeacht a fheabhsú.Ná bí ró-mhilis agus tú ag meascadh, agus ná déan iarracht an súthaire go léir a bhaint.
2. Níochán le eatánól 70-80%: Le linn níocháin, ní mór an t-aigéad núicléach a fhionraí chun a chinntiú go bhfuil an salann iarmharach nite ar shiúl.Ag an am céanna, díreach tar éis an eatánól a dhoirteadh, lártheifneoir ag luas ard ar feadh cúpla soicind, agus ansin bain an eatánól iarmharach le pípéad.Tuaslaig tar éis seasamh ag teocht an tseomra ar feadh 5-10 nóiméad.
11. Eagraíochtaí speisialta a asbhaint
1. Fíochán snáithíneach: Is í an eochair do eastóscadh RNA ó fhíocháin shnáithíneacha ar nós matán croí/cnámharlaigh ná cur isteach iomlán ar an bhfíochán.Tá dlús cille íseal ag na fíocháin seo, agus mar sin tá an méid RNA in aghaidh an aonaid meáchain fíocháin íseal, agus is fearr an oiread tosaigh agus is féidir a úsáid.Bí cinnte go meileann tú an fíochán go maith faoi choinníollacha reo.
2. Fíocháin a bhfuil cion ard próitéine/saill ann: tá cion saille inchinne/glasraí ard.Tar éis eastóscadh PCI, tá floccules bána san shárshamhail.Ní mór an comhshnaidhm a ath-eastóscadh le clóraform.
3. Fíocháin a bhfuil cion ard aigéid núicléigh/ribeóisim iontu: tá ardchion aigéid núicléigh agus ribeasaim sa spleen/tímis.Is féidir le fíocháin a mheilt faoi choinníollacha reo agus homogenization tapa ina dhiaidh sin ribozymes a dhíghníomhú.Mar sin féin, má tá an lysate ró-slaodach (mar gheall ar ábhar ard aigéid núicléacha), ní bheidh an t-eastóscadh PCI in ann srathú a dhéanamh go héifeachtach;Má chuirtear níos mó lysate leis is féidir an cheist seo a réiteach.Is féidir le heastóscadh iolrach PCI níos mó DNA iarmharach a bhaint.Má fhoirmíonn deascán bán díreach tar éis alcól a chur leis, léiríonn sé éilliú DNA.Is féidir le hath-eastóscadh le PCI aigéadach tar éis an díscaoilte éilliú DNA a bhaint.
4. Fíochán plandaí: Tá fíochán plandaí níos casta ná fíochán ainmhithe.Go ginearálta, déantar plandaí a thalamh faoi choinníollacha nítrigine leachtacha, agus mar sin tá díghrádú RNA ag einsímí endogenous neamhchoitianta.Mura réitítear fadhb an díghrádaithe, is cinnte gur neamhíonachtaí sa sampla is cúis leis.Beidh iarmhair mar thoradh ar na neamhíonachtaí atá i go leor plandaí, agus is é an chúis atá le hiarmhair go minic ná go bhfuil cosúlachtaí áirithe ag na neamhíonachtaí seo le RNA: deascann tú agus deascann mé, agus déanann tú adsorb agus mé a adsorb.Cinneann na tréithe seo gur coscairí einsíme an-láidir iad.
Faoi láthair, is féidir imoibrithe eastóscadh RNA tráchtála a oiriúnú do bheagnach gach fíocháin ainmhithe le coigeartuithe beaga, ach is beag imoibrithe eastóscadh RNA tráchtála a d'fhéadfadh a bheith oiriúnach don chuid is mó d'fhíocháin phlandaí.Go fortunately, is féidir le Foregene speisialta a sholátharfeisteáin eastósctha RNA plandaí, ní mór dúinnGléasra Trealamh Leithlisithe RNA Iomlán, Gléasra Trealamh Leithlisithe RNA Iomlán Plus.Tá an dara ceann deartha go speisialta do phlandaí a bhfuil ard-ábhar polaisiúicríde agus polyphenol acu.Maidir le heastóscadh RNA, tá aiseolas an-mhaith ó úsáideoirí saotharlainne.
12. Éifeacht reo agus leá an tsampla Féadfaidh an sampla reoite a bheith níos mó, agus ní mór é a ghearradh sula n-úsáidfear é le haghaidh eastóscadh RNA.Claonadh a bhíonn samplaí leá (b'fhéidir go páirteach) le linn gearrtha.D’fhéadfadh go mbeadh gá samplaí reoite a mheá roimh eastóscadh RNA, agus is cinnte go dtarlóidh leá le linn an phróisis seo.Uaireanta, tarlaíonn leá an tsampla freisin le linn an phróisis muilleoireachta nítrigine leachtach;nó cuirtear an sampla reoite go díreach leis an lysate gan muilleoireacht nítrigine leachtach, agus is cinnte go dtarlóidh leá roimh an homogenization iomlán.Tá sé léirithe ag turgnaimh go bhfuil fíochán reoite níos mó seans maith do dhíghrádú RNA le linn leá ná fíochán úr.An chúis dóchúil: Cuireann an próiseas reo-leá isteach ar struchtúir laistigh den chill, rud a fhágann go mbeidh sé níos éasca d’einsímí ingineacha dul i dteagmháil dhíreach leis an RNA.
13. Breithiúnas ar cháilíocht RNA De ghnáth, úsáidtear leictreafóiréis chun sláine RNA a mheas, agus úsáidtear A260/A280 chun íonacht RNA a mheas.Go teoiriciúil, tá cóimheas 28S:18S = 2.7:1 ag RNA slán, agus leagann formhór na sonraí béim ar an gcóimheas 28S:18S = 2:1.Is é fírinne an scéil nach bhfuil beagnach aon cheann den RNA a bhaintear as samplaí seachas cealla i gcóimheas 2:1 (fuarthas é seo ag baint úsáide as an Agilent Bioanalyzer).
Bíonn tionchar ag go leor fachtóirí ar thorthaí leictreafóiréis RNA, lena n-áirítear struchtúr tánaisteach, coinníollacha leictreafóiréis, ualach samplach, méid sáithithe ag EB, etc. Úsáid leictreafóiréis dúchais chun RNA a bhrath agus Marcóir DNA a úsáid mar rialú.Má tá an 28S ag 2kb agus an 18S ag 0.9kb soiléir, agus 28S: 18S > 1, is féidir leis an sláine freastal ar riachtanais an chuid is mó de na turgnaimh ina dhiaidh sin.
Is táscaire é A260/A280 a d’eascair go leor mearbhaill.Ar an gcéad dul síos, is gá brí bunaidh an táscaire seo d'aigéid núicléacha a shoiléiriú: RNA íon, a A260/280 = thart ar 2.0.Is é RNA íon an ‘cúis’ agus is é A260/A280 = 2 an ‘éifeacht’.Anois tá gach duine ag baint úsáide as A260/A280 mar 'chúis', ag smaoineamh "má tá A260/A280 = 2, ansin tá RNA íon", rud a fhágann go nádúrtha mearbhall.
Má tá suim agat, is féidir leat imoibrí beag a úsáidtear go minic in eastóscadh, mar shampla feanól, guanidine isothiocyanate, PEG, etc., a chur le do shampla RNA, agus ansin an cóimheas A260/A280 a thomhas.Is é fírinne an scéil go n-ionsúnn go leor de na himoibrithe a úsáidtear le haghaidh eastóscadh RNA, chomh maith le go leor neamhíonachtaí sa sampla, timpeall A260 agus A280, rud a dhéanann difear do A260/A280.
Is é an cur chuige is oiliúnaí faoi láthair ná samplaí RNA a scanadh sa raon 200-300 nm.Tá na tréithe seo a leanas ag cuar RNA íon: tá an cuar réidh, tá A230 agus A260 ina dhá phointe infhillte, tá A300 gar do 0, A260/A280 = timpeall 2.0, agus A260/A230 = timpeall 2.0.Mura bhfuil sonraí scanta ar fáil, ní mór an cóimheas A260/A230 a chinneadh freisin, toisc go bhfuil an cóimheas seo níos íogaire maidir le tabhairt anonn na n-eisíontas go léir a chuireann isteach ar an imoibriú einsímeach.Cuir san áireamh raon líneach na feiste (0.1–0.5 le haghaidh A260).
Tá dhá fheiniméin úsáideacha eile ann: beidh an cóimheas thart ar 0.3 níos ísle nuair a thomhaistear A260/A280 in uisce;agus tá an cóimheas a thomhaistear in EDTA 10 mM thart ar 0.2 níos airde ná an cóimheas a thomhaistear in EDTA 1 mM.
Táirgí gaolmhara:
Monaróir agus Soláthraí Kit Leithlisiú Iomlán RNA Gléasra tSín |Foregene (foreivd.com)
Sraith leithlisiú RNA – Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)
Am postála: Jul-15-2022
