Is modh é Real Time PCR, ar a dtugtar PCR cainníochtúil nó qPCR freisin, chun monatóireacht agus anailís fíor-ama ar tháirgí aimplithe PCR.
Toisc go bhfuil na buntáistí a bhaineann le hoibríocht shimplí, tapa agus áisiúil, íogaireacht ard, atrialltacht mhaith, agus ráta éillithe íseal ag PCR cainníochtúil, úsáidtear go forleathan é i dtástáil leighis, measúnú éifeachtúlachta drugaí, taighde léiriú géine, taighde transgenic, braite géine, braite pataigin, braite ainmhithe agus plandaí., tástáil bia agus réimsí eile.
Dá bhrí sin, cibé an bhfuil tú i mbun taighde bunúsach sna heolaíochtaí beatha, nó fostaithe de chuid cuideachtaí cógaisíochta, cuideachtaí feirmeoireachta ainmhithe, cuideachtaí bia, nó fiú fostaithe de chuid na n-iniúchadh iontrála-scoir agus biúró coraintín, ranna monatóireachta comhshaoil, ospidéil agus aonaid eile, beidh tú faoi lé níos mó nó níos lú Nó ní mór duit fios a bheith agat maidir le máistreacht a dhéanamh ar PCR cainníochtúil.

Prionsabal PCR Fíor-ama

Is modh é PCR Real Time ina gcuirtear substaintí fluaraiseacha leis an gcóras imoibrithe PCR, agus déantar monatóireacht ar dhéine comhartha fluaraiseachta i bpróiseas imoibrithe PCR i bhfíor-am ag ionstraim chainníochtúil PCR, agus ar deireadh déantar anailís agus próiseáil ar na sonraí turgnamhacha.

【Cuar aimpliúcháin】is é an cuar a chuireann síos ar phróiseas dinimiciúil PCR.Ní cuar easpónantúil caighdeánach é cuar aimplithe PCR i ndáiríre, ach cuar sigmoid.

[Céim ardáin de chuar aimpliúcháin]Le méadú ar líon na dtimthriallta PCR, díghníomhú DNA polymerase, ídiú dNTPanna agus primers, agus cosc ​​​​ar imoibriú sintéise ag seachtháirgí pyrophosphate imoibriúcháin, etc., ní leathnaíonn an PCR go heaspónantúil i gcónaí., agus rachaidh sé isteach i Plateau ar deireadh.

[Réigiún Fáis Easpónantúil an Chuar Aimpliúcháin]Cé go n-athraíonn céim an ardchláir go mór, i réigiún áirithe den réigiún fáis easpónantúil den chuar aimpliúcháin, tá an atrialltacht an-mhaith, rud atá an-tábhachtach le haghaidh anailís chainníochtúil ar PCR.

[Luach tairsí agus luach Ct]Shocraigh muid luach teorann braite fluaraiseachta ag an suíomh cuí i limistéar fáis easpónantúil an chuar aimpliúcháin, eadhon an luach tairsí (Tairseach).Is é trasnú an luach tairsí agus an cuar aimpliúcháin an luach Ct, is é sin, tagraíonn an luach Ct do líon na dtimthriallta (Timthriall Tairseach) nuair a shroichtear an luach tairsí.

Taispeánann an graf thíos go soiléir an gaol idir líne tairsí agus cuar aimplithe, tairsí agus luach Ct.

【Conas a chainníochtú?】

Tá sé cruthaithe ag teoiric na matamaitice go bhfuil gaol inbhéartach líneach ag an luach Ct le logarithm líon na dteimpléad tosaigh.Déanann PCR Fíor-Ama monatóireacht ar tháirgí aimplithe PCR i bhfíor-am agus déanann sé iad a chainníochtú le linn na céime aimpliúcháin easpónantúla.

I gcás gach timthriall de PCR, mhéadaigh an DNA easpónantúil faoi 2 uair, agus go luath shroich ardchlár.

Ag glacadh leis gurb é A an méid DNA tosaigh₀ , tar éis n timthriallta, is féidir méid teoiriciúil an táirge DNA a chur in iúl mar:

A _n =A ₀ ×2ⁿ

Ansin, dá mhéad an méid DNA tosaigh A 0, is luaithe a shroicheann méid an táirge aimplithe an luach braite An , agus is é an luach Ct an líon timthriallta nuair a shroicheann siad An.Is é sin, dá mhéad an méid DNA tosaigh A 0, is ea is luaithe a shroicheann buaic an chuar aimpliúcháin, agus dá réir sin is lú an líon timthriallta riachtanach n.

Déanaimid caolú grádán ar an gcaighdeán tiúchan ar a dtugtar agus é a úsáid mar theimpléad le haghaidh PCR Fíor-Ama, agus beidh sraith de chuair aimpliúcháin a fháil ag eatraimh comhionanna san ord tosú méid DNA ó níos mó go níos lú.De réir an chaidrimh líneach idir an luach Ct agus logarithm líon na dteimpléad tosaigh, aIs féidir [cuar caighdeánach] a chruthú .

Trí luach Ct an tsampla le tiúchan anaithnid a chur isteach sa chuar caighdeánach, is féidir méid teimpléad tosaigh an tsampla le tiúchan anaithnid a fháil, arb é prionsabal cainníochtúil Real Time PCR é.

Modh braite PCR Fíor-ama

Aimsíonn PCR Fíor-Ama táirgí aimplithe PCR trí dhéine an fhluaraiseachta sa chóras imoibrithe a bhrath.

Prionsabal Modh Leabaithe Datha Fluaraiseacha】

Ruaimeanna fluaraiseachaIs féidir le , mar TB Green ® , ceangal go neamhshonrach le DNA dúbailte-shnáithe i gcórais PCR agus fluaraiseacht nuair a cheanglaítear é.

Mhéadaigh an déine fluaraiseachta sa chóras imoibrithe go heaspónantúil le méadú timthriallta PCR.Tríd an déine fluaraiseachta a bhrath, is féidir monatóireacht a dhéanamh ar mhéid an aimplithe DNA sa chóras imoibrithe i bhfíor-am, agus ansin is féidir méid an teimpléid tosaigh sa sampla a mheas go droim ar ais.

【Prionsabal an mhodha taiscéalaithe fluaraiseacha】

taiscéalaí fluaraiseachais seicheamh aigéid núicléigh é le grúpa fluaraiseacha ag an deireadh 5′ agus grúpa múchta ag an deireadh 3′, atá in ann ceangal sonrach a dhéanamh leis an teimpléad.Nuair a bhíonn an taiscéalaí slán, múchtar an fhluaraiseacht a astaíonn an fluarafór ag an ngrúpa múchadh agus ní féidir leis an bhfluaraiseacht a fhluaraiseacht.Nuair a dhianscaoileadh an taiscéalaí, díscaoilfidh an tsubstaint fluaraiseacha agus scaoilfidh sé fluaraiseacht.

Cuirtear taiscéalaí fluaraiseacha leis an réiteach imoibrithe PCR.Le linn an phróisis análaithe, beidh an taiscéalaí fluaraiseacha ceangailte le suíomh sonrach an teimpléid.Le linn an phróisis síneadh, is féidir le gníomhaíocht exonuclease 5′→3′ an einsím PCR an taiscéalaí fluaraiseacha hibridithe leis an teimpléad a dhianscaoileadh, agus déantar an tsubstaint fluaraiseacha a dhícheangal chun fluaraiseacht a astú.Trí dhéine fluaraiseachta an taiscéalaí sa chóras imoibrithe a bhrath, is féidir an cuspóir atá le monatóireacht a dhéanamh ar mhéid aimplithe an táirge PCR a bhaint amach.

【Roghnú Modh Braite Fluaraiseachta】

Má úsáidtear é chun seichimh a bhfuil ard-homaleolaíocht acu a idirdhealú agus chun braite PCR ilphléacs a dhéanamh mar anailís clóscríobh SNP, ní féidir an modh taiscéalaithe fluaraiseacha a athsholáthar.
I gcás turgnaimh PCR Real Time eile, is féidir modh chimera fluaraiseachta simplí, éasca agus ar chostas íseal a úsáid.

probes Sainiúlacht láidir, in ann PCR ilphléacs

Easpa

Ceanglais shainiúlachta arda maidir le aimpliú;

ní féidir PCR ilphléacs a dhéanamhNí mór tóireadóirí sonracha a dhearadh, costas ard;

uaireanta bíonn dearadh an taiscéalaithe deacair

Táirgí Gaolmhara: