Is focal íogair é RNase nach bhfuil go leor mac léinn a dhéanann turgnaimh eastósctha RNA go minic ag iarraidh a chloisteáil.Go hiomlán armtha, díghrádaíodh an RNA a bhaintear ar deireadh leis na himoibrithe ard-tocsaineacha feanól agus Clóraform.Nílim réitithe!!!Inniu, déanaimis féachaint ar bhunús an Rnase cáiliúil.

Is núicléas é Ribonuclease (RNase), nó RNase, atá in ann RNA a hidrealú i móilíní beaga.Tá RNase, mar phróitéin mhóilín beag, neamhghnách cobhsaí .Ní féidir le steiriliú gaile gnáth-theocht agus ardbhrú agus coscairí próitéine é a dhíghníomhachtú go hiomlán.Tagann cobhsaíocht RNase go príomha ó na bannaí disulfide sa struchtúr.Mar shampla, níl ach 124 aimínaigéad ag an RNase a úsáidtear go coitianta de briseán bó-ainmhithe, ach tá 4 bhanna déshilfíde ann.Tá cobhsaíocht theirmeach den scoth ag baint le banna sulfair agus banna disulfide RNase.Ina theannta sin, tá meáchan móilíneach sách beag ag rnase agus féadann sé a chomhfhoirmiú bunaidh a athchóiriú go tapa i go leor cásanna.

Chomh maith le bheith thar a bheith cobhsaí,Tá RNases uileláithreach sa tsaotharlann .Is meicníocht cosanta bitheolaíoch é RNase.Maidir le cill, is minic a bhíonn RNA exogenous marfach.I gcomparáid le DNA exogenous, is minic a bhíonn RNA exogenous níos contúirtí.Déantar RNA a thras-scríobh agus a aistriú go sona, agus mar sin tá beagnach gach orgánach tar éis RNAses a fhorbairt chun cosaint a dhéanamh i gcoinne ionradh RNA eisghineach.Mar sin, cuireann na cealla baictéaracha a shaothraítear sa tsaotharlann agus tusa a bhaintear as RNA boladh RNase amach.Tá cuid mhór RNase i sreabháin choirp an duine (seile, deora, etc.), mar sin ná bí ag caoineadh nuair a bhíonn RNA díghrádaithe.An níos mó tú ag gol, is amhlaidh is measa an díghrádú RNA!!Níl an Deirfiúr Daiyu oiriúnach le haghaidh eastóscadh RNA!

Ina theannta sin, tá go leor RNase i do chraiceann mín freisin, agus tá RNase ar na marcóirí, na pípéid, na doirse cuisneora agus na láimhseálann dorais a bhfuil an craiceann i dteagmháil leo freisin.

Agus an oiread sin fánaíochta ann, déanaimis féachaint ar conas déileáil le RNases.

Is é an chéad rud a cheapann gach duine nuair a dhéantar RNA a bhaintDEPC(pireacarbónáit dieitile).Dínádúraíonn DEPC an próitéin go príomha trí chomhcheangal le fáinne imidazole an ghrúpa gníomhach RNase histidine, rud a chuireann cosc ​​ar ghníomhaíocht na heinsíme.Is féidir le 0.1% DEPC éifeacht a bhaint níos fearr ar Rnase, ach ní mór dúinn aird a thabhairt gur carcanaigin aitheanta é DEPC, mar sin ba chóir aird ar leith a thabhairt nuair a bhíonn sé á úsáid.

Maidir le RNase, ní mór dúinn tosú ó dhá ghné,is é an chéad cheann ná bac a chur ar ghníomhaíocht RNase ingenous

Is féidir le himoibrithe eastóscadh RNA traidisiúnta mar isothiocyanate guanidine agus DTT atá i Trizol banna disulfide RNase a oscailt, ach tá roinnt RNase ann fós, go háirithe i samplaí fíocháin, mar sin aird a thabhairt ar theocht íseal.

1.Déan an sampla fíocháin a thumadh láithreach i nítrigin leachtach tar éis é a thógáil amach, nó i dtuaslagán caomhnaithe RNA tráchtála.

2.Tar éis RNA an tsampla cille a bhaint as, cuir leis an tuaslagán lysis é agus cuir ar an mbosca oighir é

3. Is fearr nítrigin leachtach a úsáid le haghaidh meilt nuair a dhéantar samplaí fíocháin homogenized.Nuair a bhíonn homogenizer leictreach á úsáid agat gan nítrigin leachtach, tabhair aird ar an adapter homogenate a réamh-fhuaraithe go hiomlán.

Is é an dara ceann DNase exogenous

1.Bí lán-armtha, caith cóta saotharlainne, caith masc, agus bí cinnte péire lámhainní nua a chaitheamh (ná bí ró-thrifty! Ba chóir a thabhairt faoi deara go bhfuil Trizol sár-chreimneach, agus go bhfuil sé an-láidir trí lámhainní freisin, mar sin ná drip ar do lámha).

2.Ní mór na leideanna pípéad go léir a úsáidtear, feadáin EP, feadáin PCR agus trealamh eile a dhí-RNase.Is féidir é a sáithiú i 0.1% DEPC agus ansin é a bhrú faoi bhrú ard.Tabhair aird ar an oibríocht i cochall múiche.Is féidir le tyrants áitiúla earraí inchaite a cheannach go díreach chun einsímí a bhaint.

PS: Lig dom a insint duit modh leisciúil.Cé nach féidir le teocht ard agus brú ard RNase a bhaint go hiomlán, bainfidh sé cuid mhór de.Tá éifeacht mhaith ag 2 uair de theocht ard agus ardbhrú, agus níl mórán éifeacht ag eastóscadh RNA.

3 .Is féidir le halcól próitéiní a dhínádúrú,mar sin is féidir an tábla eastóscadh RNA a wiped le 75% alcól , agus is féidir lámhainní a spraeáil le halcól freisin.

4.Ba cheart an tuaslagán tuaslagtha RNA deiridh agus an fheadán lártheifneora a chóireáil le dí-RNase freisin.Is réiteach tuaslagtha RNA a úsáidtear go coitianta é uisce DEPC.Labhraímis faoin modh ullmhaithe ceart uisce DEPC (cuimhnigh an DEPC tráchtála a athphacáistiú nuair a cheannaíonn tú é)

Cuir DEPC le huisce ultrapure ag 1:1000, croith go maith, lig seasamh thar oíche ag 37 ° C, agus aimridigh ag 121 ° C faoi ardteocht agus brú ard ar feadh 15 nóiméad.Is féidir uisce DEPC a stóráil ag -20 ° C i slánchodanna 1ml.

Mar fhocal scoir, chun achoimre a dhéanamh: is é teocht íseal an eochair, déantar earraí inchaite a láimhseáil go maith, go hiomlán armtha agus níos lú cainte!

Bhuel, sin é do straitéis an lae inniu.Is mian liom an tiúchan agus an íonacht RNA go léir a luaigh tú.Tá an dá A260/A280 2.0!!!

Ar ndóigh, má úsáideann tú aoibriú teocht an tseomra trealamh eastósctha RNA, ní fhéadfaidh tú teacht ar na trioblóidí thuas.

Oibriú ag teocht an tseomra, gan DNase a chur leis, baintear RNA iomlán as cealla i 11 nóiméad, agus baintear RNA iomlán as fíocháin nó plandaí ainmhithe i 30 nóiméad.

Le haghaidh samplaí trialach, déan teagmháil le:overseas@foregene.com

Táirgí Gaolmhara:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/