Is glycoproteiní iad antasubstaintí, ar a dtugtar imdhíonglobulins (Ig) a cheanglaíonn go sonrach le hantaiginí.
 
Déantar ullmhúchán traidisiúnta antashubstainte trí ainmhithe a imdhíonadh agus trí antiserum a bhailiú.Mar sin, is gnách go mbíonn antasubstaintí san antiserum i gcoinne antaiginí neamhghaolmhara agus comhpháirteanna próitéine eile sa serum.Is éard atá i móilíní antaiginí ginearálta den chuid is mó ná go leor eipitipí éagsúla, agus mar sin is meascán d'antasubstaintí iad na gnáth-antasubstaintí freisin in aghaidh eipitipí éagsúla.Tá fiú na antasubstaintí serum traidisiúnta a dhírítear i gcoinne an epitope céanna fós comhdhéanta d'antasubstaintí ilchineálacha arna dtáirgeadh ag clóin chealla B éagsúla.Dá bhrí sin, tugtar antasubstaintí polaclónacha ar antasubstaintí gnáthshéiream freisin, nó antasubstaintí polaclónacha mar ghearr.
 
Is antashubstaint an-aonfhoirmeach é antashubstaint mhonaclónach (antashubstaint mhonaclónach) a tháirgtear trí chlón cille B amháin agus nach bhfuil dírithe ach ar epitóp ar leith.De ghnáth ullmhaítear é le teicneolaíocht hibrideach - tá teicneolaíocht antasubstainte hibridoma bunaithe ar theicneolaíocht chomhleá cille, a chomhcheanglaíonn cealla B leis an gcumas antasubstaintí sonracha agus cealla myeloma le cumas fáis gan teorainn a chur isteach i hibridomas B-chealla .Tá tréithe cille tuismitheora ag an gcill hibrideach seo.Féadann sé iomadú in vitro ar feadh tréimhse éiginnte agus neamhbhásmhar cosúil le cealla myeloma, agus féadann sé antasubstaintí sonracha cosúil le limficítí splenic a shintéisiú agus a secrete.Trí chlónáil, is féidir líne mhonaclónach a dhíorthaítear ó chill hibrideach amháin, is é sin, líne cille hibrideach, a fháil.Is antasubstaintí an-aonchineálacha iad na hantasubstaintí a tháirgeann sé i gcoinne an chinntithigh antaigineach céanna, is é sin, antasubstaintí monaclónacha.
 
Tá antasubstaintí ann mar mhonaiméir Y-chruthach amháin nó níos mó (ie, antasubstaintí monachlónacha nó antasubstaintí polachlónacha).Tá gach monaiméir Y-chruthach comhdhéanta de 4 slabhraí polypeptide, lena n-áirítear dhá slabhraí trom comhionann agus dhá slabhraí solais comhionann.Ainmnítear slabhra éadrom agus slabhra trom de réir a meáchan móilíneach.Is é barr an struchtúir Y-chruthach an réigiún athraitheach, arb é an suíomh ceangailteach antigen é.(Sliocht as Coincheap antashubstainte Bithmhonaclónach Detai)
 
Struchtúr antasubstainte
Slabhra trom
Tá cúig chineál slabhraí troma Ig mamaigh ann, ainmnithe leis na litreacha Gréagacha α, δ, ε, γ, agus μ.Tugtar IgA, IgD, IgE, IgG, agus IgM ar na hantasubstaintí comhfhreagracha.Tá difríocht idir slabhraí trom éagsúla i méid agus comhdhéanamh.Tá thart ar 450 aimínaigéid i α agus γ, agus tá thart ar 550 aimínaigéid in μ agus ε.
Tá dhá réigiún ag gach slabhra trom: an réigiún tairiseach agus an réigiún athraitheach.Tá an réigiún tairiseach céanna ag gach antasubstaintí den chineál céanna, ach tá difríochtaí idir antasubstaintí de chineálacha éagsúla.Tá réigiúin sheasta na slabhraí trom γ, α, agus δ comhdhéanta de thrí réimse Ig i dteannta a chéile, le réigiún hinge chun a solúbthacht a mhéadú;tá réigiúin sheasta na slabhraí troma μ agus ε comhdhéanta de fhearann ​​4 Ig.Tá an réigiún athraitheach den slabhra trom den antashubstaint a tháirgtear ag cealla B éagsúla difriúil, ach tá an réigiún athraitheach den antashubstaint a tháirgtear ag an gcill B céanna nó an clón cille mar an gcéanna, agus tá réigiún athraitheach gach slabhra trom thart ar 110 aimínaigéid ar fad., Agus foirm Ig fearainn amháin.
 
Slabhra éadrom
Níl ach dhá chineál slabhraí solais i mamaigh: cineál lambda agus cineál kappa.Tá dhá fhearann ​​nasctha ag gach slabhra solais: réigiún tairiseach agus réigiún inathraithe.Tá fad an tslabhra solais thart ar 211 ~ 217 aimínaigéid.Bíonn an dá shlabhra solais atá i ngach antasubstaint i gcónaí mar a chéile.Maidir le mamaigh, níl ach cineál amháin ag an slabhra solais i ngach antasubstaint: kappa nó lambda.I roinnt veirteabraigh íochtair, mar iasc cartilaginous (fishes cartilage) agus iasc cnámhach, faightear cineálacha eile slabhraí éadroma mar an cineál iota (iota).
 
Míreanna Fab agus FC
Is féidir an deighleog Fc a chomhcheangal go díreach le heinsímí nó le ruaimeanna fluaraiseacha chun antasubstaintí a lipéadú.Is é an chuid ina seamanna antashubstaintí ar an pláta le linn phróiseas ELISA, agus is é an chuid é freisin ina n-aithnítear an dara hantasubstaint agus ina cheangal in imdhíon-réamhshamhlú, inmunoblotting agus immunohistochemistry.Is féidir antasubstaintí a hidrealú ina dhá mhír F(ab) agus mír Fc amháin le heinsímí próitéalaíocha ar nós papain, nó is féidir iad a bhriseadh ón réigiún hinge le pepsin agus iad a hidrealú i mír F(ab)2 amháin agus i mír Fc amháin.Uaireanta bíonn blúirí antashubstainte IgG an-úsáideach.Mar gheall ar easpa na míre Fc, ní bheidh deascán sa mhír F(ab) leis an antigen, agus ní ghlacfar le cealla imdhíonachta i staidéir in vivo é.Mar gheall ar na blúirí beaga móilíneacha agus easpa feidhm tras-nasctha (mar gheall ar easpa deighleog Fc), úsáidtear an deighleog Fab de ghnáth le haghaidh radiolabeling i staidéir fheidhmiúla, agus úsáidtear an deighleog Fc go príomha mar ghníomhaire blocála i staining histochemical.
 
Réigiúin athraitheacha agus tairiseacha
Tá an réigiún athraitheach (réigiún V) suite ag 1/5 nó 1/4 (ina bhfuil thart ar 118 iarmhair aimínaigéad) den slabhra H in aice leis an gcríochfort N agus 1/2 (ina bhfuil thart ar 108-111 iarmhair aimínaigéad) in aice le críochfort N-slabhra L.Tá fáinne peptide ag gach réigiún V atá déanta ag bannaí disulfide laistigh den slabhra, agus tá thart ar 67 go 75 iarmhair aimínaigéad i ngach fáinne peptide.Cinneann comhdhéanamh agus socrú na n-aimínaigéad sa réigiún V sainiúlacht ceangailteach antigen an antashubstainte.Mar gheall ar na cineálacha agus na seicheamh aimínaigéid atá ag athrú i gcónaí sa réigiún V, is féidir go leor cineálacha antasubstaintí a bhfuil sainiúlachtaí antaiginí ceangailteacha éagsúla acu a fhoirmiú.Tugtar VL agus VH ar réigiúin V an slabhra L agus slabhra H, faoi seach.I VL agus VH, tá éagsúlacht níos airde ag comhdhéanamh aimínaigéad agus seicheamh roinnt réigiún áitiúil.Tugtar réigiúin hypervariable (HVR) ar na réigiúin seo.Tá comhdhéanamh agus socrú aimínaigéad na gcodanna neamh-HVR sa réigiún V sách coimeádach, ar a dtugtar an réigiún réime.Tá trí réigiún hypervariable i VL, atá suite de ghnáth ag iarmhair aimínaigéad 24 go 34 agus 89 go 97 faoi seach.Tugtar HVR1, HVR2 agus HVR3 ar na trí HVR de VL agus VH, faoi seach.Chruthaigh taighde agus anailís ar dhíraonadh criostail X-gha gurb é an réigiún hypervariable, go deimhin, an áit a nascann an antigen antashubstainte, mar sin tugtar an réigiún cinntithe comhlántachta (CDR) air.Is féidir CDR1, CDR2 agus CDR3 faoi seach a thabhairt ar HVR1, HVR2 agus HVR3 de VL agus VH.Go ginearálta, tá leibhéal níos airde hypervariability ag CDR3.Is é an réigiún hypervariable freisin an príomhshuíomh ina bhfuil deitéarmanaint idiotypic na móilíní Ig.I bhformhór na gcásanna, tá ról níos tábhachtaí ag slabhra H maidir leis an antigen a cheangal.
An réigiún tairiseach (réigiún C)suite ag 3/4 nó 4/5 (thart ar aimínaigéad 119 go dtí an críochfort C) den slabhra H in aice leis an bhfoirceann C agus 1/2 (tá thart ar 105 iarmhair aimínaigéad) in aice le foirceann C slabhra L.Tá thart ar 110 iarmhair aimínaigéad i ngach réigiún feidhmiúil den slabhra H, agus tá fáinne peptide comhdhéanta de 50-60 iarmhair aimínaigéad ceangailte ag bannaí déshilfíde.Tá comhdhéanamh agus socrú aimínaigéad an réigiúin seo sách seasmhach sa slabhra ainmhithe céanna Ig isotype L agus an slabhra cineál H céanna.Mar an gcéanna, ní féidir é a cheangal go sonrach ach leis an antigen comhfhreagrach, ach tá struchtúr a réigiún C mar an gcéanna, is é sin, tá an antigenicity céanna aige.Is féidir an capall frith-dhaonna IgG antasubstainte tánaisteach (nó frith-antasubstaint) a chomhcheangal leis an dá A teaglaim de antasubstaintí (IgG) i gcoinne exotoxins éagsúla.Is bunús tábhachtach é seo chun antasubstaintí tánaisteacha a ullmhú agus fluaraiséis, iseatóip, einsímí agus antasubstaintí lipéadaithe eile a chur i bhfeidhm.
 
 
Táirgí Gaolmhara:
Trealamh Cill Díreach RT-qPCR