Leideanna chun Aisghabháil Gliú a Fheabhsú

1. An t-ualach samplach a mhéadú le linn leictreafóiréis.

2. Bain úsáid as maolán leictreafóiréis úr-ullmhaithe.

3. Nuair a bhíonn tú ag gearradh gliú, déan iarracht an gliú a ghearradh ach amháin le stiallacha chun méid gearrtha gliú a laghdú: ní gá gliú le cúpla blúirí críche, ar shlí eile beidh tionchar aige ar an ráta aisghabhála.

4. Tar éis dhá phíosa gliú nó níos mó a leá, bain úsáid as feadán is cuma cé chomh mór agus atá an toirt agus é a aistriú chuig an gcolún céanna.

5. Is féidir leis an réiteach a chuirtear sa sol a bheith beagán níos mó, rud a chabhródh le ceangal DNA leis an membrane, ach go ginearálta ní théann sé thar 750ul.

6. Is í an eochair chun aisghabháil glóthach ná DNA a cheangal leis an gcolún trí thiúchan salainn, aigéadacht (muirear) agus hidreafóbacht an tuaslagáin sa cholún.Dá bhrí sin, má tá pH an maoláin leictreafóiréis ró-ard, is féidir 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) a chur leis an sol;d'fhonn idircheapadh níos fearr a dhéanamh ar mhóilíní DNA ar an membrane, is féidir isopropanol 30% a chur leis an teas isteach sa leacht tar éis an gliú a thuaslagadh.

7. Sula gcuirtear an t-eiliút leis, fág an colún ag teocht an tseomra ar feadh cúpla nóiméad (thart ar 10 nóiméad) chun an eatánól a ghalú go hiomlán.

8. Ar deireadh, cuir níos lú eluent leis chun an méid aisghabhála a íoslaghdú.Go ginearálta, úsáidtear 30-50μl eluent le haghaidh elution (ní ró-beag, ar shlí eile ní bheidh sé in ann an membrane a fhliuchadh, rud nach bhfuil a chabhródh le elution);tá na braoiníní elution i lár an scannáin, chun an DNA atá ceangailte leis an scannán a mhaolú go hiomlán.

9. Tar éis an eluent a chur leis, is féidir é a chur i ndabhach uisce 55 céim ar feadh 5 nóiméad nó a chur i ndabhach uisce 50 céim ar feadh níos mó ná 10 nóiméad, nó séalaithe le parafilm ag 4 céim thar oíche, agus ansin lártheifneoirithe le haghaidh aisghabháil an lá dár gcionn, tá an éifeacht go maith.

10.Cuir an eluate lártheifneoir ar ais go dtí an colún asaithe agus an lártheifneoir arís.

Modhanna agus nósanna imeachta mionsonraithe le haghaidh aisghabháil táirgí PCR

1. Gnáth-athchúrsáil rubair

Más mian leat an gliú a ghnóthú, is fearr trealamh a úsáid, atá áisiúil agus a bhfuil ráta aisghabhála beagán níos airde aige.Más gá duit é a ghnóthú de láimh i ndáiríre, is féidir leat 3 huaire an toirt TE a chur leis tar éis an gliú a ghearradh.Tar éis leá i ndabhach uisce, baintear feanól, feanól / clóraform go glan, agus déantar eatánól a deascadh.Sin é.

2. Aisghabháil DNA ó glóthacha leáphointe íseal

Íonú blúirí DNA Cuir TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) cothrom le toirt an ghlóthaigh, agus cuir i ndabhach uisce 65°C ar feadh 5 nóiméad chun an glóthach a thuaslagadh go hiomlán.

Tar éis é a thabhairt go teocht an tseomra, cuireadh méid comhionann feanól (sáithithe le TE, TE sa chiseal uachtarach, agus baineadh an ciseal níos ísle feanól), agus rinneadh an meascán a mheascadh go réidh (gan aon mheascadh ag teastáil), agus lártheifneoirithe ag 12,000 rpm ar feadh 3 nóiméad.Déan 1-2 uair.

Glac an súiteán, cuir leis 0.1 toirt d'aicéatáit sóidiam 3mol/L (pH 5.2) agus 2.5 uair toirte d'eatánól absalóideach chun deascadh eatánóil a dhéanamh.Déan an DNA íonaithe a dhíscaoileadh le méid cuí TE, tomhas an t-ábhar, agus ullmhaigh lena úsáid (is féidir é a úsáid le haghaidh anailíse ar struchtúr géine sprice, ullmhú probe, etc.).

3. Aisghabháil PCR le sainiúlacht aimpliúcháin maith

Má tá sainiúlacht an aimplithe PCR go maith, níl sé ach íonú simplí agus aisghabháil an táirge PCR.Is féidir leat 50ug/ml de phróitéiníse K a chur leis an táirge PCR, 37 céim ar feadh 1 uair an chloig, feanól/clóraform a bhaint uair amháin, clóraform a bhaint as uair amháin, agus 0.1 toirt an fheanól a chur leis.Aisghabhadh an aicéatáit sóidiam le deascadh le 2.5 toirt d’eatánól absalóideach.

Táirgí gaolmhara:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/