Meaisín PCR|An dtuigeann tú i ndáiríre?

Teicneolaíocht PCR a bhuaigh Duais Nobel

I 1993, fuair an t-eolaí Meiriceánach Mulis Duais Nobel sa Cheimic, agus ba é a ghnóthachtáil ná aireagán na teicneolaíochta PCR.Tá draíocht na teicneolaíochta PCR sna saintréithe seo a leanas: Ar an gcéad dul síos, tá an méid DNA atá le aimpliú thar a bheith beag, agus go teoiriciúil is féidir móilín amháin a úsáid le haghaidh aimplithe;ar an dara dul síos, tá an éifeachtacht aimpliúcháin ard, agus tá méid na géine sprice easpónantúil.Aimpliú, níos mó ná 10 milliún uair i gceann cúpla uair an chloig.Anois tá an ionstraim PCR in úsáid go forleathan i dtaighde eolaíocht beatha agus go leor gnéithe eile.

D’fhéadfadh go mbeadh feidhmíocht dhifriúil agus in-atrialltacht ag samhlacha éagsúla agus ag monaróirí timthriallta teirmeacha.Ní hamháin go mbíonn tionchar ag na difríochtaí seo ar éifeachtúlacht PCR ach freisin ar chruinneas agus comhsheasmhacht na sonraí a fhaightear.Is féidir le tuiscint a fháil ar ghnéithe meaisín PCR cabhrú linn rath ár dturgnaimh a uasmhéadú.

Modúl téimh

Is féidir le cruinneas teocht an timthriallta teirmeach a bheith cinntitheach maidir le rath nó teip PCR.Tá comhsheasmhacht teochta tobair go dtí an tobar ríthábhachtach freisin chun torthaí PCR iontaofa agus in-atáirgthe a fháil.

Bealach amháin chun cruinneas teirmeach a chinntiú ná tástáil a dhéanamh go minic ag baint úsáide as trealamh fíoraithe teochta agus athchalabrú de réir mar is gá ag gairmí oilte.De ghnáth úsáidtear tástálacha fíoraithe teochta chun:

Cruinneas tobair go maith i gcoibhneas le teocht socraithe sa mhodh isothermal

Cruinneas tobair go maith i gcoibhneas leis an teocht socraithe tar éis comhshó teochta

Cruinneas Teochta Lid Teas

Rialú Teochta Annealing Primer

Is feidhm den ionstraim PCR é rialú teochta grádán a éascaíonn leas iomlán a bhaint as annealing primer i PCR.Is é cuspóir an tsuímh grádáin ná teochtaí éagsúla a bhaint amach idir modúil, agus trí ardú teochta ≥2 ° C agus titim idir gach colún, is féidir teochtaí difriúla a thástáil ag an am céanna chun an teocht annealaithe primer is fearr a fháil.Go teoiriciúil, sroicheann grádán fíor teocht líneach idir modúil.

Mar sin féin, is gnách go n-úsáideann timthriallta teirmeach grádán traidisiúnta bloc teirmeach amháin agus rialaíonn siad an teocht trí dhá eilimint téimh agus fuaraithe atá suite ag an dá cheann, agus is minic a bhíonn na teorainneacha seo a leanas mar thoradh orthu:

Ní féidir ach dhá theocht a shocrú: socraítear an teocht ard agus íseal le haghaidh anáil primer ag an dá cheann den mhodúl teirmeach, agus ní féidir socrú beacht teochtaí eile a bhaint amach idir modúl

Mar gheall ar an malartú teasa idir na colúin éagsúla, is dóichí go leanann an teocht idir réigiúin éagsúla ar an modúl cuar sigmoidal seachas grádán líneach fíor.

Teocht samplach

Tá cumas an timthriallta teirmeach chun an teocht samplach a rialú an-tábhachtach maidir le cruinneas na dtorthaí PCR.Tá paraiméadair a bhaineann go sonrach le hionstraimí amhail rátaí rampaí, amanna coinneála agus halgartaim ríthábhachtach chun teocht an tsampla a thuar.

Ciallaíonn ráta téimh agus fuaraithe an mheaisín PCR go n-athraíonn an teocht idir céimeanna PCR a tharlaíonn thar thréimhse áirithe ama.Ós rud é go dtógann sé méid áirithe ama chun an teas a aistriú ón modúl go dtí an sampla, beidh ráta téimh agus fuaraithe iarbhír an tsampla níos moille.Dá bhrí sin, is gá an sainmhíniú ar luas athraithe teochta a idirdhealú agus a thuiscint.

Léiríonn an ráta rampa modúl uasta nó buaic an t-athrú teochta is tapúla is féidir leis an modúl a bhaint amach thar thréimhse an-bheag le linn an rampa.

Léiríonn an meánráta rampa bloc an ráta athraithe teochta thar thréimhse ama níos faide agus soláthróidh sé tomhas níos ionadaí ar luas meaisín PCR.

Léiríonn an t-uasráta téimh agus fuaraithe sampla agus an meánráta téimh agus fuaraithe sampla an teocht iarbhír a fhaigheann an sampla.Soláthróidh an ráta téimh agus fuaraithe samplach comparáid níos cruinne ar fheidhmíocht an mheaisín PCR agus ar an tionchar a d'fhéadfadh a bheith aige ar thorthaí PCR.

Nuair a bhíonn athsholáthar rothaithe á dhéanamh agat, moltar ionstraim a úsáid le clár ráta rampa a shamhlaíonn an modh roimhe seo le haghaidh athsholáthar níos éasca agus tionchar íosta ar atrialltacht PCR.

Níor cheart an timthriallóir teirmeach a dhearadh go céimeanna ama ach amháin tar éis don sampla an teocht socraithe a bhaint amach.Ar an mbealach seo, déanfar an t-am a chothaítear an sampla ag an teocht socraithe a choinneáil níos cruinne leis na coinníollacha timthrialla comhfhreagracha a theastaíonn sa nós imeachta oibriúcháin.

Is minic a úsáideann timthriallta teirmeacha halgartaim chasta matamaitice chun a chinntiú gur féidir le samplaí teocht socraithe a bhaint amach go tapa de réir cláir réamhshocraithe.Bunaithe ar mhéid an chórais imoibrithe agus tiús na plaistigh PCR a úsáidtear, is féidir leis an algartam teocht an tsampla a thuar agus an t-am a ghlacfaidh sé chun an teocht socraithe a bhaint amach.Ag brath ar na halgartaim seo, le linn phróiseas téimh nó fuaraithe an timthriallta teirmeach, is gnách go sáróidh an teocht bloc an luach socraithe trí phróiseas ar a dtugtar róthéamh nó fo-réiteach bloc teirmeach.Cinntíonn socrú den sórt sin go sroicheann an sampla an teocht atá leagtha síos chomh tapa agus is féidir gan ró-láimhseáil nó tearc-réiteach é féin.

Tréchur turgnamhach

I measc na bhfachtóirí ar féidir leo tréchur timthriallta teirmeach a mhéadú tá rátaí rampaí, cumraíochtaí bloc teirmeacha, agus comhtháthú ardáin uathoibrithe.

Léiríonn ráta téimh agus fuaraithe an timthriallta teirmeach an luas ag a sroicheann sé an teocht socraithe.Dá tapúla an t-ardú agus an titim teochta, is amhlaidh is tapúla a reáchtálfar an PCR, rud a chiallaíonn gur féidir níos mó turgnaimh a dhéanamh i dtréimhse áirithe ama.Ina theannta sin, is féidir turgnaimh a luathú trí úsáid a bhaint as polaiméirí DNA níos tapúla.

Tá dearadh an mhodúil timthriallta teirmeach ríthábhachtach freisin le haghaidh turgnaimh PCR.Mar shampla, ceadaíonn modúil athsholáthair solúbthacht i líon na samplaí in aghaidh an rith.Ina theannta sin, tá modúil téimh le modúil inrialaithe aonair oiriúnach chun cláir éagsúla PCR a reáchtáil ag an am céanna ar thimthriallóir teirmeach amháin.

I gcás PCR ard-thréchuir uathoibrithe, ba cheart go mbeadh na bogearraí a rialaíonn an córas láimhseála píobaireachta in-ríomhchláraithe agus comhoiriúnach.Tá córais uathoibrithe oiriúnach chun imoibrithe PCR ard-thréchuir a dhéanamh toisc gur féidir iad a rith go leanúnach gan mórán idirghabhála daonna, rud a íoslaghdaíonn an t-am a theastaíonn le haghaidh socrú turgnamhach láimhe agus ag méadú líon na n-imoibrithe laistigh de thréimhse áirithe ama .

Iontaofacht, Marthanacht agus Dearbhú Cáilíochta Rothaithe Teirmeacha

Chomh maith le cumas feidhmíochta agus tréchur, ba cheart go mbeadh an meaisín PCR in ann úsáid arís agus arís eile, strus comhshaoil ​​agus coinníollacha loingseoireachta a sheasamh.Féadfaidh roinnt déantúsóirí tuairisciú ar an gcaoi a ndéanann an ionstraim tástálacha iontaofachta agus marthanachta.Áirítear sa bhrath ionstraim PCR comhfhreagrach:

Iontaofacht: Úsáidtear rigí meicniúla chun tástálacha a dhéanamh arís agus arís eile ar chomhpháirteanna ionstraime a úsáidtear go minic, amhail cláir theirmeacha, painéil rialaithe/scáileáin tadhaill, agus modúil rothaíochta teochta.

Brú comhthimpeallach: Is féidir seomraí comhshaoil ​​​​a úsáid chun coinníollacha éagsúla turgnaimh ghnáthamh a insamhail, mar shampla teocht, taise.

Tástáil Loingseoireachta: Is féidir dianthástáil turrainge agus creathadh a dhéanamh de réir chaighdeáin an Chomhlachais Loingseoireachta Sábháilteachta Idirnáisiúnta chun a chinntiú gur féidir leis an ionstraim teacht i gcoinníollacha oibriúcháin gan damáiste.

Barántas agus seirbhís chun an meaisín PCR a chothabháil

In ainneoin diantástáil iontaofachta agus marthanachta, tá fadhbanna teicniúla ag baint le timthriallta teirmeacha thar shaolré na hionstraime.Ar mhaithe le suaimhneas intinne, ba cheart barántas, seirbhís agus cothabháil an mhonaróra a mheas nuair a bhíonn ionstraim á cheannach.

Solúbthacht seirbhísí amhail cothabháil ar an láthair/filleadh ar mhonarcha, seirbhísí cianfhaireacháin, agus ionstraimí athsholáthair sa phróiseas cothabhála, etc., chun an tionchar ar éifeachtúlacht oibre a laghdú.

Fad na tréimhse bharánta, am slánúcháin na seirbhíse, inrochtaineacht na tacaíochta teicniúla, agus scileanna pearsanra tacaíochta gairmiúla.

Indéantacht suiteáil ionstraimí, oibriú, comhar, agus fíorú chun ceanglais saotharlainne agus rialála gaolmhara a chomhlíonadh.Tá seirbhísí cothabhála ar nós fíorú teochta, tástáil agus calabrú ar fáil chun a chinntiú go bhfeidhmíonn an ionstraim i gceart leis na paraiméadair chomhfhreagracha.

Táirgí Gaolmhara: