Is é caillteanas éisteachta (HL) an galar céadfach míchumais is coitianta i ndaoine.I dtíortha forbartha, is fachtóirí géiniteacha is cúis le thart ar 80% de chásanna bodhaire prelingual i leanaí.Is iad na cinn is coitianta ná lochtanna aon-ghéine (mar a léirítear i bhFíor 1), fuarthas go raibh baint ag 124 sóchán géine le caillteanas éisteachta nonsyndromic i ndaoine, agus fachtóirí comhshaoil ​​​​is cúis leis an gcuid eile.Is é ionchlannán cochlear (feiste leictreonach a chuirtear sa chluas istigh a sholáthraíonn spreagadh leictreach go díreach don néar cloisteála) an rogha is éifeachtaí i bhfad chun cóireáil a dhéanamh ar HL tromchúiseach, agus is féidir le háis éisteachta (feiste leictreonach sheachtrach a athraíonn agus a aimplíonn tonnta fuaime) cabhrú le hothair a bhfuil HL measartha acu.Mar sin féin, níl aon drugaí ar fáil faoi láthair chun cóireáil a dhéanamh ar HL oidhreachtúil (GHL).Le blianta beaga anuas, tá aird mhéadaitheach faighte ag géinteiripe mar chur chuige a bhfuil tuar dóchais inti chun mífheidhmiú cluaise inmheánach a chóireáil.

Fíor1.Dáileadh cineál éagsúlachta a bhaineann le bodhaire.[1]

Le déanaí, d'fhoilsigh eolaithe ó Institiúid Salk agus Ollscoil Sheffield toradh taighde i dTeiripe Mhóilíneach - Modhanna & Forbairt Chliniciúil [2], a léirigh ionchais iarratais leathana do ghéinteiripe in vivo bodhaire oidhreachtúil.Dúirt Uri Manor, ollamh cúnta taighde ag Institiúid Salk agus stiúrthóir ar an Ionad Waitt um Ard-Bhithfótóinic, gur rugadh é le caillteanas éisteachta trom agus bhraith sé gur bronntanas iontach é éisteacht a athchóiriú.Fuair ​​​​a thaighde roimhe seo amach gur próitéin rialála actin é Eps8 le gníomhaíochtaí ceangailteach agus caipínithe actin;i gcealla gruaige cochlear, tá an coimpléasc próitéine a fhoirmíonn Eps8 le MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 agus GNAI3 den chuid is mó ann sa chuid is mó Tá leideanna na stereocilia fada, atá in éineacht le MYO15A logánú BAIAP2L2 ag leideanna steiréacsaí níos giorra, ag teastáil chun cuachtaí gruaige a chothabháil.Mar sin, is féidir le Eps8 fad stereocilia na gcealla gruaige a rialáil, rud atá riachtanach le haghaidh gnáthfheidhm éisteachta;Mar thoradh ar scriosadh nó sóchán Eps8 beidh steiréicilí gearra ann, rud a fhágann nach féidir an fhuaim a thiontú i gceart go comharthaí leictreacha le haghaidh braistint inchinne, rud a fhágann bodhaire dá bharr..Ag an am céanna, fuair an comhoibrí Walter Marcotti, ollamh in Ollscoil Sheffield, amach nach féidir le cealla gruaige forbairt de ghnáth in éagmais Eps8.Sa staidéar seo, tháinig Manor agus Marcotti le chéile chun imscrúdú a dhéanamh an bhféadfaí a bhfeidhm a athbhunú trí Eps8 a chur le cealla steiréaraithe agus, ar a seal, éisteacht le lucha a fheabhsú.D'úsáid an fhoireann taighde an veicteoir víreas adeno-ghaolmhar (AAV) Anc80L65 chun an t-ord códaithe ina bhfuil EPS8 de chineál fiáin a sheachadadh isteach i cochlea lucha P1-P2 nuabheirthe Eps8-/- trí instealladh membrane cruinne;i gcealla gruaige cochlear luch Deisíodh feidhm stereocilia sula n-aibíonn siad;agus bhí an éifeacht deisiúcháin tréithrithe ag teicneolaíocht íomháithe agus tomhas stereocilia.Léirigh na torthaí gur mhéadaigh Eps8 fad na stereocilia agus gur athchóirigh sé feidhm na gcealla gruaige i gcealla íseal-minicíochta.Fuair ​​​​siad amach freisin, le himeacht ama, gur cosúil go gcaillfeadh na cealla a gcumas a bheith tarrtháil ag an ngéinteiripe seo.Is é an impleacht atá ann go bhféadfadh go mbeadh gá leis an gcóireáil seo a thabhairt in utero, toisc go bhféadfadh cealla gruaige Eps8-/- a bheith aibí nó damáiste carntha tar éis a dheisiú tar éis do na lucha a rugadh.“Is próitéin é Eps8 a bhfuil go leor feidhmeanna éagsúla aige, agus tá go leor le iniúchadh fós,” a dúirt Manor.Áireofar i dtaighde amach anseo imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht géinteiripe Eps8 maidir le héisteacht a athbhunú ag céimeanna éagsúla forbartha, agus an bhféadfaí deiseanna cóireála a shíneadh.Ag comhtharlú, i mí na Samhna 2020, d’fhoilsigh an tOllamh KarenB Avraham ó Ollscoil Tel Aviv in Iosrael a thorthaí san iris EMBO Molecular Medicine [3], ag baint úsáide as teicneolaíocht nuálach géinteiripe chun víreas adeno-ghaolmhar sintéiseach neamhdhíobhálach a chruthú AAV9-PHP.B, Deisíodh an locht géine i gcealla gruaige lucha Syne4-/- trí instealladh víreas a iompraíonn an t-ord códaithe de Syne4 isteach sa chluas istigh de lucha, rud a ligeann dó dul isteach sna cealla gruaige agus an t-ábhar géiniteach iompartha a scaoileadh, rud a ligeann dóibh aibí agus feidhmiú de ghnáth (mar atá i bhFíor 2).

Fig2.Léiriú scéimreach ar anatamaíocht na cluaise inmheánach, le fócas ar orgán Corti agus feidhm cheallacha nesprin-4.

Is féidir a fheiceáil go bhfuil éifeacht chliniciúil ard ag baint le húsáid géinteiripe chun an cuspóir a bhaineann le galair oidhreachtúla a chóireáil ag leibhéal na géine a bhaint amach trí aon ghéinte mutated a chur isteach, a bhaint nó a cheartú le haghaidh cóireála (is é sin, athruithe géiniteacha an ghalair a rialú).ionchais iarratais.Is féidir na modhanna géinteiripe reatha do bhodhaire géiniteach a roinnt sna catagóirí seo a leanas:

athsholáthair géine

D’fhéadfaí a mhaíomh go bhfuil athsholáthar géine ar an gcineál géinteiripe is “simplí” atá bunaithe ar ghéin lochtach a aithint agus a athsholáthar le gnáthchóip nó cóip den chineál fiáin den ghéin.An chéad staidéar rathúil ar ghéinteiripe cluas inmheánach maidir le caillteanas éisteachta de bharr géine iompróra glutamáit vesicular 3 (VGLUT3) a scriosadh;Seachadadh AAV1-idirghabhála de ró-eisiúint VGLUT3 exogenous i gcealla gruaige cluas inmheánach (IHCs) Is féidir é a bheith mar thoradh ar aisghabháil éisteachta marthanach, aisghabháil páirteach deilbhíocht synaptic ribeach, agus freagraí dronnacha [4].Mar sin féin, sna samplaí lena n-áirítear an dá athsholáthar géine seachadta AAV a thuairiscítear sa réamhrá thuas, tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara go bhfuil na samhlacha luiche a úsáidtear le haghaidh cineálacha áirithe neamhoird caillteanas éisteachta hereditary a scriosadh géine difriúil go sealadach ó dhaoine, agus i lucha P1 , tá an chluas istigh sa chéim aibí forbartha.I gcodarsnacht leis sin, rugadh daoine le cluas istigh aibí.Cuireann an difríocht seo cosc ​​ar chur i bhfeidhm féideartha na dtorthaí luiche ar chóireáil neamhoird oidhreachtúil bodhaire daonna mura gcuirtear géinteiripe ar fáil do chluasa aibí lucha.

Eagarthóireacht Ghine: CRISPR/Cas9

I gcomparáid le “athsholáthar géine”, tá forbairt na teicneolaíochta eagarthóireachta géine tar éis tús a chur le cóireáil galair ghéiniteacha ón bhfréamh.Is é an rud is tábhachtaí ná go ndéanann an modh eagarthóireachta géine suas na heasnaimh a bhaineann le modhanna géinteiripe overexpression traidisiúnta nach bhfuil oiriúnach do ghalair bodhaire oidhreachta ceannasach, agus an fhadhb nach maireann an modh ró-bhrú fada.Tar éis do thaighdeoirí Síneacha an ailléil shóiteáin Myo6C442Y a leagadh amach go sonrach i lucha Myo6WT/C442Y ag baint úsáide as an gcóras eagarthóireachta géine AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2, agus laistigh de 5 mhí tar éis an leagadh, lucha athchóiríodh feidhm éisteachta an mhúnla;ag an am céanna, breathnaíodh freisin go bhfeabhsaíodh ráta marthanais na gcealla gruaige sa chluas istigh, tháinig cruth na cilia go rialta, agus ceartaíodh na táscairí leictreafiseolaíocha [5].Is é seo an chéad staidéar ar domhan a bhain úsáid as teicneolaíocht CRISPR/Cas9 le haghaidh cóireáil bodhaire oidhreachtúil de bharr sóchán géine Myo6, agus is dul chun cinn tábhachtach taighde é ar theicneolaíocht eagarthóireachta géine chun cóireáil a dhéanamh ar bhodhaire oidhreachtúil.Soláthraíonn an t-aistriú cliniciúil cóireála bunús eolaíoch soladach.

Modhanna seachadta géinteiripe

Chun go n-éireoidh le géinteiripe, ní féidir le móilíní DNA naked cealla a threáitear go héifeachtach mar gheall ar a n-hydrophilicity agus muirear diúltach grúpaí fosfáit, agus chun sláine na móilíní aigéid núicléacha forlíonta a áirithiú, ní mór modh sábháilte agus éifeachtach a roghnú.Déantar an DNA forlíonta a sheachadadh chuig an spriocchill nó fíocháin.Úsáidtear AAV go forleathan mar fheithicil seachadta le haghaidh cóireáil galair mar gheall ar a éifeacht tógálach ard, imdhíonacht íseal, agus tropism leathan ar chineálacha éagsúla fíocháin.Faoi láthair, tá comhlacht mór taighde tar éis trópachas na bhfochineálacha éagsúla AAV a chinneadh i gcoibhneas le cineálacha éagsúla cille i cochlea na luiche.Trí úsáid a bhaint as saintréithe seachadta AAV in éineacht le tionscnóirí cille-shonracha, is féidir léiriú cille-shonrach a bhaint amach, rud a fhéadfaidh éifeachtaí lasmuigh den sprioc a laghdú.Ina theannta sin, mar mhalairt ar veicteoirí traidisiúnta AAV, tá veicteoirí AAV sintéiseacha nua á bhforbairt i gcónaí agus léiríonn siad cumas aistrithe níos fearr sa chluas istigh, arb é AAV2/Anc80L65 an ceann is mó a úsáidtear.Is féidir modhanna seachadta neamh-víreasacha a roinnt tuilleadh i modhanna fisiceacha (micrinstealladh agus electroporation) agus modhanna ceimiceacha (lipid-bhunaithe, polaiméir-bhunaithe, agus nanacháithníní óir).Baineadh úsáid as an dá chur chuige i gcóireáil neamhoird bodhaire oidhreachtúil agus tá buntáistí agus teorainneacha éagsúla léirithe acu.Chomh maith leis an bhfeithicil seachadta le haghaidh géinteiripe mar fheithicil, is féidir cineálacha cur chuige éagsúla a úsáid le haghaidh riarachán géine in vivo bunaithe ar chineálacha éagsúla spriocchealla, bealaí riaracháin agus éifeachtúlacht theiripeach.Mar gheall ar struchtúr casta an chluas istigh tá sé deacair spriocchealla a bhaint amach agus tá dáileadh gníomhairí eagarthóireachta genome mall.Tá an labyrinth membranous suite laistigh de labyrinth cnámhach an chnámh ama agus folaíonn sé an duct cochlear, duct leathchiorclach, utricle, agus balún.Cuireann a leithlisiú coibhneasta, an scaipeadh limfeach íosta, agus an scaradh ón fhuil trí bhacainn lúbra fola teorainn le seachadadh sistéamach éifeachtach na teiripe do lucha nua-naíoch amháin.Chun titers víreasacha atá oiriúnach le haghaidh géinteiripe a fháil, tá gá le hinstealladh áitiúil de veicteoirí víreasacha isteach sa chluas istigh.Áirítear ar bhealaí bunaithe insteallta [6]: (1) membrane fuinneog bhabhta (RWM), (2) tracheostomy, (3) cochleostomy endolymphatic nó perilymphatic, (4) membrane fuinneog bhabhta móide fuinneoga Tube (CF) (mar atá i bhFíor 3).

Fíor3.Seachadadh géinteiripe sa chluas istigh.

Cé go bhfuil go leor dul chun cinn déanta sa ghéinteiripe, bunaithe ar spriocanna aistrithe cliniciúla, ní mór tuilleadh oibre a dhéanamh sular féidir le géinteiripe a bheith ina rogha cóireála céadlíne d’othair a bhfuil galair ghéiniteacha orthu, go háirithe maidir le forbairt veicteoirí sábháilte agus éifeachtacha agus modh seachadta.Ach creidimid go mbeidh na cineálacha cóireálacha seo ina stáplacha de theiripe phearsantaithe go luath amach anseo agus go mbeidh tionchar an-dearfach acu ar shaol na ndaoine a bhfuil neamhoird ghéiniteacha orthu agus ar a dteaghlaigh.

Sheol Foregene freisin trealamh scagthástála ard-tréchur le haghaidh géinte spriocdhírithe, atá tapa agus is féidir frithghníomhartha trascríobh droim ar ais agus qPCR a dhéanamh gan eastóscadh RNA.

Naisc Táirge

Trealamh Cill Díreach RT-qPCR – Taqman/SYBR GREEN I

Le haghaidh tuilleadh faisnéise táirge, déan teagmháil le:

overseas@foregene.com