Is í an ghné den scoth den imoibriú PCR ná a chumas aimplithe mór agus íogaireacht an-ard.D'fhonn feabhas a chur ar fheidhmíocht PCR agus éifeachtúlacht braite, táimid tiomanta do chumas aimplithe PCR agus íogaireacht braite a fheabhsú, ach tá an tinneas cinn i bpróiseas an turgnaimh.Is minic a tharlaíonn dearfacha bréagacha, agus d’fhéadfadh méid an-bheag de thras-éilliú samplach nó éilliú táirge PCR a bheith ina chúis le dearfacha bréagacha sa turgnamh.
Cúig chineál éillithe táirge PCR
Tá go leor cúiseanna ann le héilliú PCR, ar féidir iad a roinnt go garbh sna catagóirí seo a leanas:
Déantar éilliú eiseamail go príomha mar gheall ar éilliú an choimeádáin chun an t-eiseamal a bhailiú, nó nuair a chuirtear an t-eiseamal, sceitheadh amach as an gcoimeádán mar gheall ar shéalaithe scaoilte, nó go gcloítear an t-eiseamal ar an taobh amuigh den choimeádán, rud a fhágann tras-éilliú;Is é an toradh a bhíonn ar éilliú ná éilliú idir eiseamail;is féidir le roinnt eiseamail mhiocróbacha, go háirithe víris, scaipeadh le haerasóil nó le haerasóil a fhoirmiú, rud a fhágann éilliú frithpháirteach.
Is é an chúis is mó le linn ullmhú imoibrithe PCR, an gunna sampla, coimeádán, uisce driogtha dúbailte agus réitigh eile a éillithe ag an teimpléad PCR aigéad núicléach.
I saotharlanna bitheolaíochta móilíneacha agus roinnt saotharlanna a úsáideann plasmidí clónáilte mar rialuithe dearfacha, tá fadhb an éillithe plasmid clónáilte coitianta freisin.Toisc go bhfuil an t-ábhar clónála plasmid i méid aonaid sách ard, agus tá gá le níos mó uirlisí agus imoibrithe sa phróiseas íonú, agus is dócha go mbeidh an plasmid i gcealla beo éillithe mar gheall ar fhás láidir agus cumas atáirgeadh na gcealla beo.
Is é éilliú táirgí aimplithe an fhadhb éillithe is coitianta in imoibrithe PCR.Toisc go bhfuil cainníocht chóip an táirge PCR mór (go ginearálta 1013 cóip / ml), atá i bhfad níos airde ná teorainn uimhir chóip braite PCR, is féidir le méid an-bheag éillithe táirge PCR a bheith ina chúis le dearfacha bréagacha.
Is é truailliú aerasóil an cineál éillithe is dóichí i dtáirgí PCR, agus is é an bealach is éasca le neamhaird a dhéanamh air freisin.Tá sé déanta ag an frithchuimilt idir an dromchla leacht agus an t-aer.Go ginearálta, is féidir éilliú aerasóil a fhoirmiú nuair a osclaítear an clúdach, nuair a bhíonn an sampla asúite, nó fiú nuair a chroithtear an feadán imoibrithe go bríomhar.De réir ríomhaireachtaí, is féidir le cáithnín aerasóil 48,000 cóip a bheith ann, agus mar sin is fadhb é an truailliú a tharlaíonn mar gheall ar aird ar leith.
Go háirithe, is minic a úsáideann saotharlanna tástála an péire céanna primers chun géine áirithe a thástáil.Le himeacht ama, tarlóidh méid mór éillithe táirge PCR sa spás saotharlainne.Chomh luath agus a tharlaíonn éilliú den sórt sin, tá sé deacair é a dhíchur i mbeagán ama.
Maidir leis na chéad trí chineál truaillithe, is féidir linn modhanna éifeachtacha a úsáid chun a sheachaint, ach is deacair an truailliú de bharr táirgí PCR a chosc, go háirithe i dtógáil saotharlanna PCR neamhchaighdeánach.Sa phróiseas PCR, nuair a bheidh an barr pípéad sucks agus séideadh an leacht, agus osclaítear an clúdach feadán PCR, déanfar aerasóil a fhoirmiú.Tá sé deacair deireadh a chur leis na móilíní DNA a iompraíonn an t-aerasól (is féidir le haerasól amháin na mílte DNA a iompar) toisc go snámhann siad san aer.Nuair a bheidh an chéad bhabhta eile de thurgnaimh PCR tugtha isteach, beidh dearfach bréagach ann dosheachanta.
Mar a léirítear san fhigiúr thíos, mhéadaigh an rialú diúltach an banda úis comhfhreagrach freisin:
Tugtar isteach an chéad chuid den cheist seo maidir le truailliú agus cosc PCR anseo.Tabharfaidh an chéad eagrán eile an dara cuid duit "Cosc ar éilliú táirge PCR", mar sin fanacht tiúnta!
Am postála: Jul-25-2017
