Creidim go dtiocfaidh gach duine i gcónaí ar fhadhbanna den sórt sin nó fadhbanna den sórt sin agus iad ag déanamh frithghníomhartha PCR, ach is féidir an chuid is mó díobh a rangú ina dhá phríomhfhadhb:

Róbheagán aimpliú ar an teimpléad géine (aimpliú);
An iomarca aimpliú géine neamh-sprioc.
Tá úsáid breiseán ar cheann de na comhstraitéisí chun na fadhbanna seo a réiteach.De ghnáth tá dhá ghné ag ról na mbreiseán:
struchtúr tánaisteachde ghéinte (struchtúr tánaisteach);
Laghdaigh priming neamhshonrach.
Inniu, tabharfaidh an t-eagarthóir isteach go hachomair duit na breiseáin choitianta i bhfrithghníomhartha PCR agus a bhfeidhmeanna.
Breiseáin a laghdaíonn struchtúr tánaisteach
sulfocsaíd(DMSO)
samplaí géinele hábhar ard GC.Mar sin féin, laghdaíonn DMSO go mór gníomhaíocht Taq polymerase.Dá bhrí sin, caithfidh gach duine inrochtaineacht an teimpléid agus gníomhaíocht an pholaiméiráis a chothromú.Molann an t-eagarthóir gur féidir leat triail a bhaint as tiúchain éagsúla DSMO, mar shampla ó 2% go 10%, chun an tiúchan a oireann do do thurgnamh a fháil.
Glantaigh neamh-ianach
De ghnáth, laghdaíonn glantaigh neamh-ianach, mar shampla 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 nó NP-40, struchtúr tánaisteach DNA.Cé gur féidir leis seo aimpliú na géine teimpléad a mhéadú, cuirfidh sé faoi deara freisin an trioblóid a bhaineann le aimpliú neamh-shonrach.Mar sin, oibríonn na breiseáin seo go maith le haghaidh imoibrithe PCR íseal-toraidh gan smionagar, ach níl siad chomh maith le haghaidh imoibrithe PRC sách eisíonta.Buntáiste eile a bhaineann le glantaigh neamh-ianach ná laghdú ar éilliú SDS.De ghnáth le linn an phróisis eastósctha DNA, tabharfar SDS go dtí an chéim PCR, rud a chuireann bac mór ar ghníomhaíocht an pholaiméiráis.Dá bhrí sin, trí 0.5% Tween-20 nó Tween-40 a chur leis an imoibriú is féidir éifeachtaí diúltacha SDS a neodrú.
Betaine_
Is féidir le Betaine aimpliú DNA a fheabhsú trí fhoirmiú struchtúir thánaisteach a laghdú agus go ginearálta is breisiú “mistéireach” é le feisteáin PCR tráchtála.Más mian leat betaine a úsáid, ba chóir duit betaine nó betaine mono-hydrate (Betaine nó Betaine mono-hydrate), ach ní hidreaclóiríd betaine (Betaine HCl), a choigeartú go dtí tiúchan deiridh 1-1.7M.Is féidir le Betaine cabhrú freisin le sainiúlacht a fheabhsú toisc go gcuireann sé deireadh leis an spleáchas ar chomhdhéanamh bunphéirí ar leá DNA/dínádúrú DNA.
Breiseáin chun priming neamh-sonrach a laghdú
Formamide
Is breiseán PCR orgánach a úsáidtear go coitianta é Formamide.Is féidir é a chomhcheangal le mór-groove agus mion-groove i DNA, rud a laghdaíonn cobhsaíocht an máistir DNA héilics dúbailte agus ísliú an teocht leá DNA.Is gnách go mbíonn tiúchan na formamide a úsáidtear i dturgnaimh PCR 1% -5%.
Tetramethylclóiríd amóiniam( TMAC)
Is féidir le clóiríd tetramethylammonium sainiúlacht hibridiú (sainiúlacht hibridithe) a mhéadú agus teocht leá DNA a mhéadú.Mar sin, is féidir le TMAC priming neamhshonrach a bhaint agus mícheangal DNA agus RNA a laghdú.Má úsáideann túprimers degeneratesan imoibriú PCR , cuimhnigh TMAC a chur leis, a úsáidtear go coitianta ag tiúchan 15-100mM.
Breiseáin Choitianta Eile
Chomh maith leis an dá chatagóir de bhreiseáin a luaitear thuas, tá go leor breiseáin coitianta in imoibrithe PCR, cé go bhfuil feidhmeanna éagsúla acu, tá siad an-tábhachtach freisin.
ian maignéisiam
Is comhfhachtóir fíor-riachtanach (cofactor) de polymerase é ian maignéisiam, is é sin le rá, gan ian maignéisiam, tá polymerase neamhghníomhach.Mar sin féin, is féidir leis an iomarca iain mhaignéisiam difear a dhéanamh freisin ar éifeachtúlacht an pholaiméiráis.Athróidh tiúchan na n-ian maignéisiam i ngach imoibriú PCR.Oibreáin chealaithe (amhail EDTA nó chiotráite), bíonn tionchar ag tiúchan dNTPanna agus próitéiní ar thiúchan na n-ian maignéisiam.Mar sin, má tá fadhbanna agat le do thurgnamh PCR, is féidir leat iarracht a dhéanamh tiúchain éagsúla ian maignéisiam a athrú, mar shampla, ó 1.0 go 4.0mM, le eatramh de 0.5-1mM eatarthu.
Is fiú a thabhairt faoi deara go bhféadfadh srathú tiúchan an tuaslagán clóiríd mhaignéisiam a bheith mar thoradh ar thimthriallta reo-leáite iolracha.Dá bhrí sin, ní mór duit é a dhíscaoileadh go hiomlán roimh gach úsáid, agus é a mheascadh go maith roimh é a úsáid.
Albam serum bó(albamán buaibheach, BSA)
I dturgnaimh cheimic mhóilíneach, is breiseán an-choitianta é serum albaimin buaibheach, go háirithe i ndíleá einsímí srianta agus turgnaimh PCR.I bhfrithghníomhartha PCR, tá BSA ina chuidiú chun ábhar salaithe cosúil le comhdhúile feanólacha a laghdú.Agus deirtear freisin gur féidir leis an greamaitheacht imoibreoirí a laghdú go dtí balla an fheadáin tástála.San imoibriú PCR, de ghnáth is féidir leis an tiúchan BSA a chuirtear leis 0.8 mg/ml a bhaint amach.
 
Táirgí Gaolmhara:
Laoch PCR(le dath)
Laoch PCR