Is réamhriachtanais iad feidhmíocht primers agus probes i gcéim luath imoibrithe PCR a fhíorú agus na coinníollacha imoibrithe is oiriúnaí a chinneadh chun dul chun cinn réidh turgnaimh fhoirmiúla a chinntiú.
Mar sin, conas is gá dúinn an probe primer a dhearbhú go luath?
Is iad na príomhtháscairí bunlíne, cuar aimpliúcháin, luach ct, éifeachtúlacht aimplithe, braite sampla íseal-tiúchana, CV, etc.
Bunlíne
Is é an bunlíne an líne chothrománach sa chuar aimpliúcháin PCR.Sa chéad chúpla timthriall den imoibriú aimpliúcháin PCR, ní athraíonn an comhartha fluaraiseachta mórán agus cruthaíonn sé líne dhíreach.Is í an líne dhíreach seo an bhunlíne.
Agus tú ag scagadh probes primer PCR, tabhair aird ar cibé an bhfuil an bunlíne leibhéal.Cuirfidh íonacht an tiúchan probe primer isteach ar an mbunlíne, mar shampla go n-ardóidh nó go dtiteann an bunlíne.Is táscaire an-iomasach é an bunlíne freisin.
Cuar Aimpliúcháin
Táscaire iomasach eile is ea cruth an chuar aimpliúcháin.Is fearr cuar S-chruthach a bheith ann chun aimpliú tánaisteach nó cuair aimpliúcháin neamhghnácha eile a sheachaint.
Ct Luach
Is é an luach Ct líon na dtimthriallta a fhreagraíonn don phointe infhillte ón mbunlíne go dtí an fás easpónantúil.
Maidir leis an sampla céanna, bíonn cuair aimpliúcháin éagsúla mar thoradh ar tóireadóirí primer éagsúla, agus beidh tionchar ag an éifeachtúlacht aimpliúcháin agus an chéim trasnaíochta ar an luach Ct comhfhreagrach.Go teoiriciúil, dá lú luach Ct an probe primer a roghnaíonn muid, is amhlaidh is fearr.
Éifeachtúlacht Aimpliúcháin
Is é ceann de na modhanna is iontaofa agus cobhsaí chun éifeachtúlacht aimplithe PCR a mheas ná an cuar caighdeánach, atá aitheanta go forleathan ag taighdeoirí freisin.Is éard atá i gceist leis an modh ná sraith samplaí a dhéanamh chun líon coibhneasta na dteimpléad sprice a rialú.Déantar na samplaí seo de ghnáth trí chaolú sraitheach de réitigh stoc tiubhaithe, is é an caolú 10-huaire an ceann is coitianta a úsáidtear.Trí úsáid a bhaint as sraith samplaí caolaithe, ag baint úsáide as clár caighdeánach qPCR chun aimpliú chun an luach Cq a fháil, agus ar deireadh tarraing cuar caighdeánach de réir tiúchan gach sampla agus an luach Cq comhfhreagrach chun an chothromóid líneach Cq= -klgX0+b a fháil, agus an éifeachtacht aimplithe E=10(-1 /k)-1.Agus qPCR á úsáid le haghaidh anailís chainníochtúil, is gá go mbeadh an éifeachtacht aimplithe sa raon 90% -110% (3.6>k>3.1).
Brath Samplaí íseal-tiúchana
Nuair a bhíonn an tiúchan samplach íseal, tá rátaí braite probes primer éagsúla difriúil.Roghnaímid 20 sampla íseal-tiúchana le macasamhlú, agus is é an córas primer-probe leis an ráta braite is airde is fearr.
Comhéifeacht Athraithe (CV)
Is féidir 10 sampla dúblach a aimsiú le taiscéalaithe primer éagsúla de réir chaighdeán líne an imoibrí chun aimpliú aigéid núicléigh a bhrath.
Imoibrithe Cainníochtúla:
Cruinneas
Ba cheart go gcomhlíonfadh an cruinneas laistigh de bhaisc amháin: is é ≤5% an comhéifeacht éagsúlachta (CV,%) de luach logartamach an tiúchan tástála.Nuair a bhíonn an tiúchan samplach íseal, is é ≤10% an comhéifeacht éagsúlachta (CV,%) den logarithm den tiúchan braite
Imoibrithe cáilíochtúla:
Cruinneas
Ba cheart go gcomhlíonfadh an cruinneas laistigh de bhaisc amháin:
(1) Comhéifeacht éagsúlachta luach Ct (CV,%) ≤5%
Déantar an sampla céanna a thástáil go comhthreomhar ar feadh 10 n-uaire, agus ba cheart go mbeadh na torthaí tástála comhsheasmhach
Am postála: Meán Fómhair-18-2021
