Údair: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Aonad: Ospidéal Jiaozhou, Ospidéal Dongfang Cleamhnaithe le hOllscoil Tongji

Faoi láthair, is é swab scornach an príomhchineál sampla le haghaidh braite aigéid núicléacha pataigin riospráide.Tá go leor cineálacha réitigh caomhnaithe sampla a úsáidtear go coitianta, agus is gá iad go léir a chuisniú nó a reoite le haghaidh iompair agus stórála;Tá sé deacair an próiseas iomlán teocht íseal a rialú le linn an phróisis bhailiúcháin agus iompair, agus tá sé deacair an rialú cáilíochta a chinntiú roimh thástáil samplach^[1-2].

Is endonucleóis é RNase (RNase) a hidrealaíonn RNA, ag baint den chuid is mó de naisc fosfadiester idir núicléatídí.Tá an móilín RNase an-chobhsaí, tá bannaí disulfide sa struchtúr, agus ní gá cations défhiúsacha a bheith i láthair dá ghníomhaíocht, mar sin ní dhéantar RNase a dhínádúrú go héasca, agus is furasta é a athnádú fiú tar éis teocht ard nó dínádúrú a úsáid.Roinntear RNAses i cinn ingenous agus exogenous.Is féidir na RNase ingenous a scaoileadh ag an am céanna nuair a réabtar cealla.Dá bhrí sin, is céim an-chriticiúil é deireadh a chur le ról RNAses endogenous sa phróiseas eastósctha RNA.Déantar RNases exogenous a dháileadh go forleathan.Tá RNases san aer, craiceann daonna, gruaig agus seile, ar chúiseanna tábhachtacha iad le díghrádú éasca RNA^[3].

Iarratas sonraí

CANS-CL02-A009 Moltar sna ceanglais theicniúla gur cheart caighdeáin cháilíochta uisce iomchuí a cheapadh de réir an iarratais;Coimeádáin aerdhíonacha indiúscartha:

RNase/Aicmiú

(1) RNase A

Is endoribonuclease é Ribonuclease A (RNase A), a dhíorthaítear ó briseán buaibheach, a fhéadfaidh ionsaí sonrach a dhéanamh ar fhoirceann 3′ iarmhair pirimidín ar RNA, ag gearradh cítosín nó uracil déanta ag núicléatídí cóngaracha.Nasc fosfadiester, is é táirge deiridh an imoibrithe ná núicléitíd pirimidín 3′ agus oligonucleotide le núicléitíd pirimidín 3′ ag an deireadh.

(2) RNase T1

Díorthaítear Ribonuclease T1 (RNase T1) ó Aspergillus orjzae, gníomhaíonn sé go sonrach ar an bhfosfáit 3′-críochfort guanín, agus tá an suíomh scoilteachta idir fosfáit 3′ guanín agus hiodrocsaile 5′ de núicléatídí cóngaracha.Is é táirge deiridh an imoibrithe 3′aigéad guanailic agus blúirí oligonucleotide le haigéad 3′guanylic ag an deireadh.

(3) RNase H

Fuarthas Ribonuclease H (RNase H) ar dtús ó fhíochán thymus lao, agus tá a ghéin ionchódaithe clónáilte isteach i Escherichia coli.Féadann sé DNA a dhíghrádú go sonrach: snáitheanna RNA i ndéphléacsanna hibrideacha RNA, rud a fhágann go bhfuil oligonucleotides agus mononucleotides le foircinn 3′-OH agus 5′-monafosfáit, ní féidir leis DNA nó RNA aonshnáithe nó dúbailte a dhíghrádú.

RNase

Feidhm agus úsáid

Is féidir le ribonuclease díghrádú aigéid ribonucleic (RNA) a chatalú agus is féidir é a shintéisiú go saorga.Úsáidtear ointment íocshláinte go topically chun tráma agus pian comhpháirteach a chóireáil.De réir tuairiscí, is féidir le ribonuclease meitibileacht na gceall óstach a athrú, sintéis víreas a chosc, iomadú víreas in vitro a bhac, agus bac a chur ar fhoirmiú víreas vaccinia agus herpes i suthanna sicín.Úsáid chliniciúil instealladh laethúil ionmhatánach ribonuclease de 180 mg, atá tairbheach do chóireáil einceifilíteas eipidéime, is féidir le ribonuclease díghrádú aigéad ribonucleic (RNA) a chatalú, agus is féidir é a shintéisiú go saorga anois.Úsáidtear ointment íocshláinte go topically chun tráma agus pian comhpháirteach a chóireáil.De réir tuairiscí, is féidir le ribonuclease meitibileacht na gceall óstach a athrú, sintéis víreas a chosc, iomadú víreas in vitro a bhac, agus bac a chur ar fhoirmiú víreas vaccinia agus herpes i suthanna sicín.Tá úsáid chliniciúil instealladh laethúil ionmhatánach ribonuclease de 180 mg tairbheach le haghaidh cóireáil einceifilíteas eipidéime.

RNase

Sainmhíniú Cosc

Sainmhíniú ar aonad coscaire RNase: Is aonad amháin é méid na heinsíme a theastaíonn chun 50% de ghníomhaíocht 5ng RNase A a chosc.

Conas a Oibríonn Coscairí RNase

Iseatiocianáit Guanidine:

Is comhdhúil orgánach é Guanidine isothiocyanate leis an bhfoirmle mhóilíneach C2H6N4S.Úsáidtear go príomha i míochaine bhitheolaíoch, imoibrithe ceimiceacha, etc. Is gníomhaire líse próitéine é Guanidine isothiocyanate, agus is minic a úsáidtear é mar phríomh-chomhpháirt de thuaslagán lysis in imoibrithe diagnóiseacha móilíneacha.Féadann sé fíochán a lyse, struchtúr cille a scrios agus aigéad núicléach a dhícheangal ó núicléaspróitéin, agus tá dínádúrú láidir aige ar RNase.Is é an t-inhibitor RNase is éifeachtaí faoi láthair.

Is imoibrí eastósctha RNA iomlán úrscéal é TRIzol a fhéadfaidh RNA iomlán a bhaint as cealla nó fíocháin go díreach.Tá substaintí cosúil le feanól agus guanidine iseatiocianáit ann, ar féidir leo cur isteach go tapa ar chealla agus bac a chur ar núicléas a scaoileann cealla.

(Mar sin féin, tá an guanidine isothiocyanate contúirteach do shláinte taighdeoirí saotharlainne.)

RNasin:

Gliocoprotein aigéid a bhaintear as ae francach nó blastoderm daonna.Is coscaire neamhiomaíoch é Rnasin de RNase, ar féidir leis ceangal a dhéanamh le RNases éagsúla chun iad a dhíghníomhachtú.

(Tuilleadh sonraí: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hteocht ard:

Is modh coitianta dínádúraithe próitéine í teocht ard freisin.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

Is inhibitor RNase láidir ach neamhiomlán é DEPC, ar féidir leis bac a chur ar ghníomhaíocht RNase trí chomhcheangal le fáinne imidazole aimínaigéad an ghrúpa gníomhach RNase chun próitéiní a dhínádúrú.

Coimpléasc ribonucleoside Vanadyl:

Coimpléasc déanta ag iain ocsaíd vanadium agus núicléasídí, a cheanglaíonn le RNase i bhfoirm substaintí trasdula, ar féidir leo bac a chur ar ghníomhaíocht RNase beagnach go hiomlán.

eile:

Tá éifeacht coisctheach áirithe ag SDS, úiré, cré diatomaceous, etc. ar RNase freisin.

Léirmheasanna Saineolaithe

Li Yujie Príomhtheicneoir

Stiúrthóir na Roinne Saotharlainne, Ospidéal Jiaozhou, Ospidéal Dongfang Cleamhnaithe le hOllscoil Tongji

Chun bith-dhíghrádú RNase exogenous a chosc, ba chóir maisc, lámhainní agus hataí a chaitheamh agus a athsholáthar go minic le linn phróiseas eastósctha RNA.Ní mór gach earraí gloine a bhácáil in oigheann thriomú ag 200°C ar feadh níos mó ná 2 uair an chloig.Is gá ábhair a úsáidtear le haghaidh bácála, mar shampla plaisteach, a chóireáil le huisce DEPC, agus ansin nite le huisce driogtha.Ba cheart na himoibrithe nó na feistí a úsáidtear chun RNA a eastóscadh, a chaomhnú agus a shainaithint a thiomnú do RNA, agus ba cheart limistéar oibríochta RNA neamhspleách a bhunú.

tagairtí:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Baictéir agus víris sa nasopharynx díreach roimh tosú na n-ionfhabhtuithe géara riospráide íochtair i leanaí Dúchasacha na hAstráile[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Brainse Rialaithe Ionfhabhtaithe Ospidéil de Chumann Leigheas Coisctheach na Síne.Treoirlínte maidir le bailiú agus cigireacht eiseamail mhiocróbacha cliniciúla [J].Iris na Síne ar Ionfhabhtú Ospidéil, 2018(20):3192-3200.

[3] “Tástáil Chliniciúil Deich Míle Cén Fáth Imleabhar Tástála Bitheolaíochta Mhóilíneach”