Treoir Anailíse Fadhbanna

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Toradh íseal nó gan aon DNA

De ghnáth tá go leor fachtóirí ann a théann i bhfeidhm ar an toradh DNA genomic, lena n-áirítear foinse an tsampla, aois an tsampla, coinníollacha stórála an tsampla, agus an oibríocht.

Níorbh fhéidir DNA genomic a fháil le linn eastóscadh

1. Déantar na samplaí fíocháin a stóráil nó a stóráil go míchuí ar feadh ró-fhada, rud a fhágann díghrádú an DNA genomic.

Moladh: Stóráil samplaí fíocháin i nítrigin leachtach nó -20°C;déan iarracht samplaí nua-bhailithe a úsáid le haghaidh eastóscadh DNA géanómaíochta.

2. D'fhéadfadh sé nach mbainfí an DNA géanómach comhfhreagrach as méid an tsampla róbheag.

Moladh: I gcás samplaí fíocháin atá stóráilte ar feadh i bhfad nó a bhfuil díghrádú DNA géanóm mór orthu, is féidir méid na samplaí fíocháin a mhéadú go cuí chun DNA géanóm suntasach a bhaint as.Is féidir méid an tsampla a chinneadh de réir riachtanais DNA, ach níor chóir go mbeadh an sampla úr níos mó ná 100mg, agus níor chóir go mbeadh an sampla tirim níos mó ná 30mg.

3. Níl an sampla talamh le nítrigin leachtach nó curtha ar feadh ró-fhada tar éis nítrigine leachtach.

Moladh: Le linn eastóscadh DNA, ní mór an sampla a bheith talamh go hiomlán le nítrigin leachtach chun an balla cille a bhriseadh;tar éis meilt, le do thoil aistrigh an púdar samplach go PL1 réamhthéite ag 65°C chomh luath agus is féidir (a luaithe a bheidh an púdar talún leáite, tosóidh an DNA genomic ag díghrádú go tapa).

4. Bíonn gníomhaíocht laghdaithe nó díghníomhaithe mar thoradh ar stóráil mhíchuí Foregene Protease.

Moladh: Deimhnigh coinníollacha stórála Foregene Protease nó cuir Foregene Protease nua ina ionad le haghaidh hidrealú einsímeach.

5. Déantar an trealamh a stóráil nó a stóráil go míchuí ar feadh ró-fhada, rud a fhágann go dteipeann ar roinnt comhpháirteanna sa trealamh.

Moladh: Trealamh nua eastósctha DNA géanómaíochta plandaí a cheannach le haghaidh oibríochtaí gaolmhara.

6. Úsáid mhíchuí a bhaint as an trealamh.

Moladh: Ceannaigh Trealamh Aonrúcháin DNA Plandaí atá tiomnaithe do shamplaí le haghaidh eastóscadh agus íonú DNA géanóm plandaí.

7. Maolán WB gan anihidriúil eatánól.

Moladh: Déan cinnte an méid ceart eatánóil absalóideach a chur le Buffer WB.

8. Níor triomaíodh an t-eiliúint ar an membrane silica i gceart.

Moladh: Cuir an elient réamhthéite ag 65 leis℃dropwise go lár an membrane glóthach shilice, agus é a fhágáil ag teocht an tseomra ar feadh 5 nóiméad chun an éifeachtúlacht elution a mhéadú.

Eastóscadh chun DNA géanóm ísealtáirgeachta a fháil

1. Déantar an sampla a stóráil nó a stóráil go míchuí ar feadh ró-fhada, rud a fhágann díghrádú DNA genomic.

Moladh: Stóráil samplaí fíocháin ag -20℃;déan iarracht samplaí fíocháin nua-bhailithe a úsáid le haghaidh eastóscadh DNA géanómach.

2. Má tá méid na samplaí fíocháin ró-bheag, beidh an DNA genomic asbhainte níos lú.

Moladh: Tá roinnt samplaí plandaí saibhir in uisce, mar shampla plandaí uisceacha mar algaí, etc., is féidir an dáileog a mhéadú go cuí nó is féidir an t-uisce a dhíhiodráitiú beagán roimh an oibríocht.

3. Ní raibh na samplaí meilte go maith le nítrigin leachtach nó fágadh iad ag teocht an tseomra ar feadh ró-fhada tar éis meilt.

Moladh: Ní mór an meilt nítrigine leachtach a bheith leordhóthanach, agus ba cheart an balla cille samplach a bhriseadh a oiread agus is féidir;díreach tar éis an mheilt, ba cheart an púdar samplach a aistriú go 65℃Maolán PL1 réamhthéite don chéad chéim eile.

4. Gan an trealamh ceart a úsáid.

Moladh: Bain úsáid as Fearas Leithlisithe DNA Plandaí tiomnaithe chun DNA géanóm plandaí a bhaint agus a íonú.

5. Bíonn gníomhaíocht laghdaithe nó díghníomhaithe mar thoradh ar stóráil mhíchuí Foregene Protease.

Moladh: Deimhnigh coinníollacha stórála Foregene Protease nó cuir Foregene Protease nua ina ionad le haghaidh hidrealú einsímeach.

6. Fadhb eleent

Moladh: Bain úsáid as Buffer EB le haghaidh elution;má úsáideann ddH₂O nó eluents eile, déan cinnte go bhfuil pH an eluent idir 7.0-8.5.

7. Níl an eluent dripped i gceart

Moladh: Cuir an titim elution go lár an scannáin shilice le do thoil agus é a fhágáil ag teocht an tseomra ar feadh 5 nóiméad chun an éifeachtúlacht elution a mhéadú.

8. Tá an toirt eluent ró-bheag

Moladh: Bain úsáid as an eluent le haghaidh elution DNA genomic de réir na dtreoracha, ar a laghad nach lú ná 100μl.

DNA géanóm bhaintear le íonacht íseal

Mar thoradh ar íonacht íseal DNA géanóm beidh teip nó droch-éifeacht na dturgnaimh iartheachtacha, mar shampla: ní féidir an einsím a ghearradh, agus ní féidir an sprioc-bhlúire géine a fháil trí PCR.

1. Éilliú próitéin ilghnéitheach, éilliú RNA.

Anailís: Níor úsáideadh Maolán PW chun an colún a nigh;Níor úsáideadh maolán PW chun an colún a ní ag an luas lártheifneora ceart.

Moladh: déan iarracht a chinntiú nach mbíonn aon fhrasaíocht san shástán nuair a théann an súthach tríd an gcolún;a bheith cinnte go nigh an colún íonú le Buffer PW de réir na dtreoracha, agus ní féidir an chéim seo a fhágáil ar lár.

2. Truailliú ian eisíontais.

Anailís: Fágadh colún níocháin Buffer WB ar lár nó níor nite ach uair amháin, rud a d'eascair éilliú ianach iarmharach.

Moladh: Bí cinnte nigh faoi dhó le Buffer WB de réir na dtreoracha chun hiain iarmharacha a bhaint a oiread agus is féidir.

3. Éilliú RNase.

Anailís: Cuirtear RNase exogenous leis an Maolán;Mar thoradh ar oibriú mícheart níocháin i Maolán PW beidh RNase iarmharach agus beidh tionchar aige ar oibríochtaí turgnamhacha RNA iartheachtacha, amhail trascríobh in vitro.

Moladh: Is féidir le feisteáin eastósctha aigéid núicléacha sraith Foregene RNA a bhaint gan RNase breise, agus ní gá RNase a bheith ag gach imoibrí i Kit Leithlisiú DNA Plandaí;a bheith cinnte go nigh an colún íonú le Buffer PW de réir na dtreoracha, agus ní féidir an chéim seo a fhágáil ar lár.

4. Iarmhair eatánóil.

Anailís: Tar éis an colún íonú a ní le Buffer WB, níor rinneadh aon lártheifneoiriú feadán folamh.

Moladh: Lean na treoracha maidir le lártheifneoiriú feadán folamh ceart.

Lámhleabhar Treorach:

Lámhleabhar Trealamh Aonrú DNA Plandaí