Is éard atá i roinnt aireagán réabhlóideach i stair na teicneolaíochta braite i m'intinn ná teicneolaíocht imdhíonlipéadaithe atá bunaithe ar phrionsabal na gceangal sainiúil antaigin-antasubstainte, teicneolaíocht PCR agus teicneolaíocht seicheamhaithe.Sa lá atá inniu beimid ag caint faoi theicneolaíocht PCR.De réir éabhlóid na teicneolaíochta PCR, is gnách go roinneann daoine teicneolaíocht PCR i dtrí ghlúin: gnáth-theicneolaíocht PCR, teicneolaíocht PCR cainníochtúil fluaraiseachta fíor-ama agus teicneolaíocht PCR dhigiteach.
Cteicníc PCR ommon
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Kary Mullis invented an imoibriú slabhrúil polaiméaráise (imoibriú slabhra polaiméire , PCR) i 1983. Deirtear nuair a bhí sé ag tiomáint a chailín, go tobann bhí splanc inspioráide aige agus smaoinigh sé ar phrionsabal PCR (ar na buntáistí a bhaineann le tiomáint).Bronnadh an Duais Nobel sa Cheimic ar Kary Mullis i 1993. Dúirt an New York Times: “Highly original and significant, almost divideing bitheolaíocht into pre-PCR and post-PCR eras.
Prionsabal PCR: Faoi chatalú DNA polymerase, úsáidtear an DNA snáithe máthar mar theimpléad, agus úsáidtear an primer sonrach mar phointe tosaigh an síneadh, agus déantar an DNA snáithe iníon comhlántach le teimpléad snáithe na máthar DNA a chóipeáil in vitro trí dhínádúrú, annealing, síneadh agus céimeanna eile.Is teicneolaíocht aimplithe sintéise DNA in vitro é, ar féidir léi aon DNA sprice in vitro a mhéadú go tapa agus go sonrach.
Buntáistí PCR gnáth
1.Modh clasaiceach, caighdeáin idirnáisiúnta agus intíre a chomhlánú
2.Costas níos ísle imoibrithe ionstraime
3.Is féidir táirgí PCR a aisghabháil le haghaidh turgnaimh bhitheolaíocht mhóilíneach eile
Meaisín PCR Foregene Molta: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Táirgí gaolmhara: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Míbhuntáistí a bhaineann le gnáth PCR
1.éasca le truailliú
2.oibríocht chasta
3.anailís cháilíochtúil amháin
4.Íogaireacht mheasartha
5.Tá aimpliú neamhshonrach ann, agus nuair a bhíonn an banna neamhshonrach ar aon mhéid leis an spriocbhanna, ní féidir idirdhealú a dhéanamh air
CPCR leictreafóiréis apillary-bhunaithe
Mar fhreagra ar easnaimh an ghnáth-PCR, tá roinnt déantúsóirí tar éis ionstraimí a thabhairt isteach bunaithe ar phrionsabal an leictreafóiréis ribeach.Tá an chéim leictreafóiréis tar éis aimpliú PCR a chríochnú sa ribeach.Tá an íogaireacht níos airde, agus is féidir an difríocht idir roinnt bunanna a idirdhealú agus is féidir leis an aimpliú a ríomh ag MAERKER.ábhar táirge.Is é an míbhuntáiste ná go gcaithfear an táirge PCR a oscailt agus a chur san ionstraim fós, agus tá baol mór éillithe ann fós.
CapillaryEleictreafóiréis
2. Teicneolaíocht chainníochtúil PCR (Cainníochtúil Fíor-ama PCR, qPCR) fíor-amaIs teicneolaíocht chainníochtúil nua aigéad núicléach é PCR cainníochtúil fluaraiseacha, ar a dtugtar freisin Real-Time PCR, a d'fhorbair PE (Perkin Elmer) i 1995. Tá stair forbartha PCR cainníochtúla fluaraiseacha ina stair de streachailtí anam-chorraithe na bhfathach mar ABI, Roche, agus Bio-Rad.Má tá suim agat, is féidir leat é a sheiceáil amach.Is é an teicníc seo an teicníc PCR leathchainníochtúil is aibí agus a úsáidtear go forleathan faoi láthair.
Meaisín qPCR molta: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Modh datha fluaraiseachta (SYBR Green I):Is é SYBR Green I an dath ceangailteach DNA is coitianta a úsáidtear le haghaidh PCR cainníochtúil, a cheanglaíonn go neamh-sonrach le DNA snáithe dúbailte.Sa stát saor, astaíonn SYBR Green fhluaraiseacht lag, ach aon uair amháin faoi cheangal DNA dúbailte-snáithe, méadaíonn a fhluaraiseacht 1000-huaire.Dá bhrí sin, tá an comhartha fluaraiseachta iomlán a astaítear trí imoibriú comhréireach leis an méid DNA dúbailte-snáithe atá i láthair agus méadóidh sé le méadú an táirge aimplithe.Ós rud é go gceanglaíonn an dath go neamh-sonrach le DNA dhá shnáithe, féadfar torthaí dearfacha bréagacha a ghiniúint.
Táirgí gaolmhara: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Modh probe fluaraiseacha (teicneolaíocht Taqman): Le linnAimpliú PCR, cuirtear tóireadóir fluaraiseachta ar leith leis ag an am céanna le péire primers.Is oligonucleotide líneach é an taiscéalaí, le grúpa tuairisceoirí fluaraiseacha agus grúpa múchadh fluaraiseacha faoi seach lipéadaithe ag an dá cheann.Nuair a bhíonn an taiscéalaí slán, tá an comhartha fluaraiseacha a astaíonn an grúpa tuairisceoirí ionsúite ag an ngrúpa quencher, agus a bhrath Níl aon chomhartha fluaraiseacha;le linn aimplithe PCR (sa chéim síneadh), déanfaidh gníomhaíocht Dicer 5'-3' einsím Taq díleá agus díghrádú ar an taiscéalaí, ionas go mbeidh an grúpa fluaraiseachta tuairisceora agus an grúpa fluaraiseacha quencher scartha, ionas go mbeidh an córas monatóireachta fluaraiseachta Is féidir an comhartha fluaraiseachta a fháil, is é sin, gach uair a dhéantar slabhra DNA a aimpliú, is éard atá i gceist le móilíní fluaraiseacha a fhoirmiú, is é an comhartha fluaraiseachta iomlán a réadaíonn an comhartha fluaraiseachta iomlán. s agus foirmiú táirgí PCR.Is é modh probe Taqman an modh braite is coitianta a úsáidtear i mbrath cliniciúil.
Táirgí gaolmhara: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Buntáistí qPCR
1.Tá an modh aibí agus tá an trealamh tacaíochta agus na himoibrithe críochnaithe
2.Meánchostas imoibrithe
3.éasca le húsáid
4.Íogaireacht bhrath ard agus sainiúlacht
Míbhuntáistí qPCR
Cailltear brath mar thoradh ar shóchán na sprice.
Ní féidir toradh braite teimpléid íseal-tiúchana a chinneadh.
Tá earráid mhór ann nuair a úsáidtear an cuar caighdeánach le haghaidh braite cainníochtúil.
3. Teicneolaíocht dhigiteach PCR (PCR digiteach, dPCR).
Teicníc is ea PCR digiteach chun móilíní aigéid núicléigh a chainníochtú absalóideach.I gcomparáid le qPCR, is féidir le PCR digiteach líon na móilíní DNA/RNA a léamh go díreach, arb é absalóideach cainníochtú na móilíní aigéid núicléigh sa sampla tosaigh.I 1999, mhol Bert Vogelstein agus Kenneth W. Kin-zler coincheap dPCR go foirmiúil.
In 2006, ba é Fluidigm an chéad duine a tháirg ionstraim dPCR tráchtála sliseanna-bhunaithe.In 2009, sheol Life Technologies na córais OpenArray agus QuantStudio 12K Flex dPCR.In 2013, sheol Life Technologies an córas QuantStudio 3DdPCR, a úsáideann teicneolaíocht sliseanna microsreabhán nanascála ard-dlúis chun samplaí a dháileadh go cothrom ar 20,000 cealla aonair.san imoibriú go maith.
In 2011, sheol Bio-Rad an ionstraim QX100 dPCR droplet-bhunaithe, a úsáideann teicneolaíocht uisce-in-ola chun an sampla a dháileadh go cothrom ar 20,000 braoinín uisce-in-ola, agus úsáideann anailíseoir braoiníní chun anailís a dhéanamh ar na braoiníní.In 2012, sheol RainDance an ionstraim RainDrop dPCR, arna thiomáint ag gás ardbhrú, chun gach córas imoibrithe caighdeánach a roinnt ina eibleacht imoibrithe ina bhfuil 1 milliún go 10 milliún micrea-braoinín leibhéal picoliter.
Go dtí seo, tá dhá dhruid mhóra déanta ag PCR digiteach, cineál sliseanna agus cineál braoiníní.Is cuma cén cineál PCR digiteach, tá a phrionsabail lárnacha ag teorainn le caolú, críochphointe PCR agus dáileadh Poisson.Tá an córas imoibrithe PCR caighdeánach ina bhfuil teimpléid aigéad núicléacha roinnte go cothrom i na mílte imoibrithe PCR, a dháiltear ar sceallóga nó microdroplets, ionas go mbeidh móilín teimpléad i ngach imoibriú, agus déantar imoibriú PCR teimpléad aon-mhóilín.Trí léamh an fhluaraiseachta Déantar láithreacht nó neamhláithreacht an chomhartha a chomhaireamh, agus déantar an cainníochtú iomlán tar éis dáileadh staidrimh Poisson a chalabrú.
Seo a leanas na saintréithe atá ag roinnt ardán PCR digiteach a d’úsáid mé:
1. Bio-Rad QX200 droplet digiteach PCR Bith-RadIs ardán digiteach PCR digiteach an-chlasaiceach é QX200, an próiseas braite bunúsach: gineann an gineadóir droplet 20,000 sampla. Déantar micrea-braoiníní uisce-in-ola a aimpliú ar ghnáth-mheaisín PCR, agus ar deireadh léitear comhartha fluaraiseachta gach micrea-braoin ag léitheoir micrea-droplet.Tá an oibríocht níos casta, agus tá an baol truaillithe meánach.
PCR digiteach micreabhuille Xinyi TD1Is ardán PCR digiteach baile é Xinyi TD1, an próiseas braite bunúsach: giniúint 30,000-50,000 braoinín uisce-in-ola trí ghineadóir droplet, amplify ar ionstraim PCR coitianta, agus ar deireadh pas a fháil Léann an léitheoir droplet comhartha fluaraiseacha gach braoiníní.Déantar giniúint braoiníní agus léamh san ardán seo i sliseanna tiomnaithe le riosca íseal éillithe.
STILLA Naica sliseanna micrea-droplet PCR digiteachIs ardán PCR digiteach réasúnta nua é STILLA Naica.Is é an próiseas braite bunúsach ná: cuir an réiteach imoibrithe ar an sliseanna, cuir an sliseanna isteach sa chóras giniúna agus aimplithe micrea-droplet, agus giniúint 30,000 micrea-braoinín.Scaiptear ar an sliseanna, agus críochnaítear aimpliú PCR ar an sliseanna.Ansin aistrítear an sliseanna amplified chuig an gcóras anailíse léitheoireachta micrea-droplet, agus léitear an comhartha fluaraiseacha trí phictiúir a ghlacadh.Ós rud é go dtarlaíonn an próiseas iomlán i sliseanna dúnta, tá an baol éillithe íseal.
4. PCR digiteach sliseanna ThermoFisher QuantStudio 3D
ThermoFisher Is ardán PCR digiteach clasaiceach eile atá bunaithe ar sliseanna é QuantStudio 3D.Is é a phróiseas braite bunúsach ná: cuir an tuaslagán imoibrithe isteach sa scaiptheoir, agus scaipeadh an réiteach imoibrithe go cothrom ar an sliseanna le 20,000 microwells tríd an scaiptheoir., cuir an sliseanna ar an meaisín PCR chun aimpliú, agus ar deireadh cuir an sliseanna isteach sa léitheoir agus glac le grianghraf chun an comhartha fluaraiseacha a léamh.Tá an oibríocht sách casta, agus déantar an próiseas iomlán i sliseanna dúnta, agus tá an baol éillithe íseal.
5. PCR digiteach sliseanna soiléireachta JN MEDSYS
JN MEDSYS Is ardán PCR digiteach sách nua de chineál sliseanna é Soiléire.Is é a phróiseas braite bunúsach: cuir an tuaslagán imoibrithe isteach sa applicator, agus scaipeadh an réiteach imoibrithe go cothrom ar 10,000 feadáin PCR atá socraithe sa fheadán PCR tríd an applicator.Ar an sliseanna microporous, téann an réiteach imoibrithe isteach sa sliseanna trí ghníomh ribeach, agus cuirtear an feadán PCR leis an sliseanna ar an meaisín PCR le haghaidh aimplithe, agus ar deireadh cuirtear an sliseanna isteach sa léitheoir chun an comhartha fluaraiseachta a léamh trí ghrianghraf a ghlacadh.Tá an oibríocht níos casta.Tá an baol éillithe íseal.
Déantar achoimre mar seo a leanas ar pharaiméadair gach ardán PCR digiteach:
Is iad seo a leanas táscairí meastóireachta an ardáin PCR digiteach: líon na n-aonad scoilte, líon na gcainéal fluaraiseacha, castacht na hoibríochta agus an baol éillithe.Ach is é an rud is tábhachtaí ná an cruinneas braite.Is é bealach amháin chun ardáin PCR digiteacha a mheas ná ardáin PCR digiteacha iolracha a úsáid chun a chéile a fhíorú, agus bealach eile ná substaintí caighdeánacha a úsáid le luachanna cruinn.
Buntáistí dPCR
1.Fíor-chainníochtú a bhaint amach
2.Íogaireacht agus sainiúlacht níos airde
3.Is féidir samplaí cóip íseal a bhrath
Míbhuntáistí dPCR1. Trealamh agus imoibrithe daor 2. Oibriú casta agus am braite fada 3. Raon braite cúng
Faoi láthair, tá a gcuid buntáistí agus míbhuntáistí féin ag na trí ghlúin de theicneolaíocht PCR, agus tá a réimsí iarratais féin ag gach ceann acu, agus ní caidreamh é a chuireann glúin amháin in ionad an chinn eile.Chuir dul chun cinn leanúnach na teicneolaíochta beocht nua isteach i dteicneolaíocht PCR, rud a chuir ar a chumas treo iarratais amháin i ndiaidh a chéile a dhíghlasáil, rud a fhágann go bhfuil braite aigéad núicléach níos áisiúla agus níos cruinne.
Foinse: Tógann an Dr Yuan tú le haghaidh tástála
Táirgí Molta:
Am postála: Samhain-18-2022
