• Facebook
  • nascthain
  • youtube

Luaidhe

RNA fada neamhchódaithe, is RNA neamhchódaithe é lncRNA a bhfuil fad níos mó ná 200 núicléatídí aige, go ginearálta idir 200-100000 nt.Rialaíonn lncRNA léiriú géine ag leibhéil epigenetic, trascríobh agus iar-trascríobh, agus glacann sé páirt i tost crómasóim X, inphriontáil genome agus modhnú crómatin, gníomhachtú trascríobh, trasnaíocht trascríobh, iompar núicléach, rialáil timthriall cille, rialáil difreála cille, agus éifeachtaí cúitimh dáileog (éifeacht cúitimh dáileog) agus go leor próisis rialála tábhachtacha eile a bhaineann go dlúth le tarlú, forbairt agus cosc ​​​​ar ghalair daonna i láthair na huaire de ghalair, bithmhíochaine amháin.

01  Cineálacha agus tréithe LncRNA

nuacht723 (1)

Tá lncRNA roinnte ina go leor cineálacha de réir foinsí éagsúla a fhoirmithe, mar a thaispeántar san fhíor thuas.Tá na tréithe seo a leanas aige:

1. Is gnách go mbíonn lncRNAs níos faide, le léiriú dinimiciúil agus modhanna splicing éagsúla le linn difreála
2. I gcomparáid le géinte códaithe, tá leibhéal léirithe níos ísle ag lncRNA de ghnáth
3. Tá sainiúlacht léirithe ama agus spásúlachta soiléir ag an gcuid is mó de lncRNAs i bpróiseas na difreála agus na forbartha fíocháin
4. Tá léirithe tréithiúla i tumaí agus galair eile
5. Tá suíomhanna focheallach lncRNA éagsúil
6. Tá an seicheamh íseal i gcaomhnú, ach tá méid áirithe caomhnaithe ag an bhfeidhm, etc.

02 Ceisteanna Coitianta maidir le Trascríobh Droim ar Ais LncRNA

Mar gheall ar an ábhar íseal lncRNA i gcealla, fad fada agus struchtúr ardleibhéil, is minic go mbíonn struchtúir chasta ag RNA den sórt sin mar lúba gas nó bioráin ghruaige, agus tá RT-qPCR seans maith ar fhadhbanna a bhaineann le trascríobh droim ar ais nár éirigh leo nó éifeachtacht íseal.

03 LncRNA réiteach trascríobh droim ar ais

nuacht723 (2)

Sa riail lárnach, tugtar trascríobh droim ar ais ar an bpróiseas a bhaineann le víris RNA a úsáideann a n-athscríbhinn droim ar ais féin chun DNA a shintéisiú ag baint úsáide as RNA mar theimpléad.Trascríobh droim ar ais a thugtar ar an bpróiseas a bhaineann le transcriptase droim ar ais víreas RNA a úsáid chun teimpléad cDNA in vitro a shintéisiú.Na príomhghnéithe atá san áireamh sa chóras trascríobh droim ar ais: teimpléad RNA, transcriptase droim ar ais, primers agus comhpháirteanna eile.

Teimpléad 1.RNA

Léirítear tionchar teimpléad RNA ar thrascríobh droim ar ais ina struchtúr, íonacht agus sláine.Dá airde íonacht agus sláine an RNA a bhaintear, is airde an éifeachtúlacht trascríobh droim ar ais agus is cruinne na torthaí cainníochtúla ina dhiaidh sin.Is minic go mbíonn iarmhair alcóil agus salainn guanidine san RNA arna íonú ag imoibrithe eastóscadh RNA a úsáidtear go coitianta, a bhfuil éifeacht coisctheach láidir acu ar an gcuid is mó de transcriptase droim ar ais.

2.Reverse transcriptase

Tá príomhthionchar ag an trascríobh droim ar ais ar an gcóras trascríobh droim ar ais.Is é 42°C de ghnáth an teocht oiriúnach don trascríobh droim ar ais a úsáidtear i bhformhór na saotharlann.Go deimhin, éilíonn oscailt an struchtúir RNA ardleibhéil teocht níos airde, agus tá na ceanglais maidir leis an transcriptase droim ar ais níos airde.

3.primer

I measc na bpriméirí trascríobh droim ar ais tá primers géine-shonracha, priméirí randamacha agus primers Oligo dT.Níl eireabaill polyA i bhformhór na lncRNAs, agus tá sé tábhachtach na primers randamacha a mheaitseáil i gceart le Oligo dT.

Comhpháirteanna 4.Other

I bhfianaise go bhfuil RNA go háirithe éasca le díghrádú, is féidir tabhairt isteach comhpháirteanna sa chóras trascríobh droim ar ais a íoslaghdú, rud a d'fhéadfadh cosc ​​​​a chur go héifeachtach ar iontráil RNase agus dul chun cinn rianúil an trascríobh droim ar ais a chinntiú.

Foregenea fhaightear ó theimpléad RNA, trascríobh droim ar ais go qPCR

Coimhdeacht go cuimsitheach do bhrath lncRNA

nuacht723 (3)

Ainmhithe Iomlán RNA IsólásKit (le colún bainte gDNA)

nuacht723 (4)

Cill Iomlán RNA IsólásKit (le colún bainte gDNA)

nuacht723 (5)

Lnc-RT HeroTM I(Le gDNase)(Super Premix do shintéis cDNA den chéad snáithe ó lncRNA)

nuacht723 (6)

Fíor-Ama PCR EasyTM-SYBR Glas I

Abuntáistí ofeastóscadh RNA:

Úsáideann an trealamh teicneolaíocht eastósctha RNA tríú glúin, ní gá DNase a úsáid.

11 nóiméad ó 96, 24, 12, agus cealla saothraithe pláta 6-maith, eastóscadh ard-éifeachtúlachta RNA cille iomlán saor ó gDNA, ard-íonachta, ardchaighdeáin.

Buntáistí trascríobh droim ar ais lncRNA:

Córas trascríobh droim ar ais a forbraíodh go speisialta do LncRNA chun éilliú DNA géanómach a bhaint go tapa.

Tá ardchobhsaíocht teirmeach ag an gcóras trascríobh droim ar ais agus tá dea-fheidhmíocht trascríobh droim ar ais ag 50 °C fós.

Is féidir teimpléid le hábhar GC ard agus struchtúr tánaisteach casta a aisiompú le héifeachtacht ard.

Buntáistíof qPCR:

Tá éifeachtacht aimpliúcháin níos airde ag tús te Foregene Taq Polymerase, íogaireacht aimpliúcháin níos airde, agus sainiúlacht aimpliúcháin níos airde

Déanann an Real PCR Easy Mix optamaithe go bhfuil íogaireacht braite níos airde ag SYBR Green I, agus tá a dhéine fluaraiseachta 3-5 huaire níos mó ná táirgí den chineál céanna, ar féidir leo freastal ar riachtanais cineálacha éagsúla turgnaimh chainníochtúla fhluaraiseachta.


Am postála: Iúil-23-2021