Is imoibriú é PCR Díreach a úsáideann fíocháin ainmhithe nó plandaí go díreach le haghaidh aimpliú gan eastóscadh aigéid núicléacha.Ar go leor bealaí, oibríonn PCR díreach cosúil le PCR rialta

Is é an príomh-difríocht an maolán saincheaptha a úsáidtear i PCR díreach, is féidir an sampla a chur faoi réir imoibriú PCR go díreach gan eastóscadh aigéad núicléach, ach tá ceanglais chomhfhreagracha ann maidir le caoinfhulaingt na n-einsímí agus comhoiriúnacht an mhaoláin a bhaineann leis an imoibriú díreach PCR.

Cé go bhfuil níos mó nó níos lú coscairí PCR i samplaí coitianta, is féidir le PCR díreach aimpliú iontaofa a bhaint amach fós faoi ghníomhaíocht einsímí agus maoláin.Éilíonn imoibriú PCR traidisiúnta aigéad núicléach ardcháilíochta mar theimpléad, rud a d'fhéadfadh bac a chur ar dhul chun cinn rianúil imoibriú PCR má tá próitéiní agus neamhíonachtaí eile sa teimpléad.Faoi láthair tá Direct PCR ar cheann de na teicneolaíochtaí is mó tóir i réimse na diagnóisic mhóilíneach.

01 Úsáideadh PCR Díreach le haghaidh ainmhithe agus plandaí ar dtús

Is é an t-iarratas is luaithe de PCR díreach i réimse na n-ainmhithe agus na bplandaí, mar shampla fuil, fíochán agus gruaig an francach, cat, sicín, coinín, caoirigh, eallach, etc., duilleoga plandaí agus síolta, etc., a úsáidtear chun staidéar a dhéanamh ar ghéinitíopáil, transgenic, braiteadh plasmid, anailís cnag giniúna, aithint foinse DNA, aithint speiceas, anailís SNP agus réimsí eile.

Tá roinnt gnéithe coitianta ag na réimsí seo, is é sin, tá an t-ábhar géine sprice sách ard agus tá eastóscadh aigéid núicléacha trioblóideach, mar sin ní féidir le PCR díreach ach am a shábháil agus tionchar beag a bheith aige ar na torthaí, ach freisin costas a shábháil.

Is ábhar le blianta beaga anuas é PCR díreach a úsáidtear le haghaidh braite pataigin, tá go leor iarrachtaí déanta ag roinnt déantúsóirí imoibrithe PCR sa treo seo agus iad ag déanamh nuálaíochta.Go háirithe san eipidéim COVID-19 seo, tá go leor táirgí braite den sórt sin le feiceáil ar an margadh, ar nós Kit Braite Aigéad Núicléach SARS-CoV-2 (Modh Taiscéalaithe Fluaraiseachta Ilphléacs PCR) arna thaighde agus arna fhorbairt ag Foregene, a úsáideann teicneolaíocht RT PCR fíor-ama (rRT-PCR) le haghaidh braite cáilíochtúil ar shamplaí SARS-CoV-2 núicléasacha sróine nó aigéad núicléasach i n-aigéad núicléasach swngeal nó sv.

Tá Foregene ar cheann de na cuideachtaí a úsáideann teicneolaíocht Direct PCR, chun gnáth ORF1ab, N, E, agus a bhrath.athraitheach lineage aigéid núicléacha i samplaí de swab nasopharyngeal nó oropharyngeal daonna ar nós SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (UK), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) agus P.1 lineage (BR).

02  Imoibrithe ag teastáil le haghaidh PCR díreach

Lysate samplach

Is féidir an lysate samplach a chumrú leat féin nó a cheannach.Déanfaidh an difríocht i gcomhdhéanamh brandaí éagsúla lysate an cumas lísing difriúil, agus ansin beidh an t-am lísing beagán difriúil.Mar shampla, le haghaidh samplaí fíocháin ainmhithe a ullmhú, moltar lysis 30 nóiméad nó thar oíche go ginearálta, agus tá an réiteach lysis le haghaidh víris idir 3-10 nóiméad.

PCR meascán máistir

Tá sé molta a úsáid te-tús DNA polymerase chun feabhas a chur ar aimpliú ar leith agus an cumas aimplithe a mhéadú.Is polaiméaráis an-fhulangach é croílár PCR díreach.

Déan comhpháirteanna sa sampla a chuireann isteach ar aimpliú DNA a dhíchur nó a chosc

Tar éis an sampla a phróiseáil leis an lysate, scaoilfear próitéiní, lipidí agus smionagar cille eile, cuirfidh na substaintí seo bac ar imoibriú PCR.Dá bhrí sin, éilíonn PCR díreach go gcuirfí baint nó coscairí comhfhreagracha leis chun tionchar na bhfachtóirí seo a laghdú.

03  Bailiúchán de chúig phointe eolais de PCR díreach

Gcéad dul síos, is teicneolaíocht dhíreach PCR é teicneolaíocht Direct PCR le haghaidh samplaí bitheolaíocha éagsúla.Faoin gcoinníoll teicniúil seo, ní gá an t-aigéad núicléach a scaradh agus a bhaint as, an sampla fíocháin a úsáid go díreach mar an réad, agus cuir na príomhghéine sprice leis an imoibriú PCR a dhéanamh.

Sa dara háit, ní hamháin gur teicneolaíocht aimplithe traidisiúnta teimpléad DNA í an teicneolaíocht Direct PCR, ach folaíonn sé freisin PCR trascríobh droim ar ais teimpléad RNA.

Sa tríú háit, ní hamháin go ndéanann teicneolaíocht Direct PCR imoibrithe cáilíochtúla PCR ar shamplaí fíocháin, ach folaíonn sé freisin imoibrithe qPCR Fíor-Ama, a éilíonn go bhfuil cumas láidir trasnaíochta fluaraiseachta frith-chúlra ag an gcóras imoibrithe agus múchadh fluaraiseachta ingenous an cumas freasúla.

Ceathrú, ní mór do na samplaí atá dírithe ar an teicneolaíocht Direct PCR ach scaoileadh teimpléid aigéad núicléacha, agus ní bhaintear próitéiní, polaisiúicrídí, ions salainn, etc. a chuireann isteach ar imoibriú PCR.A éilíonn go bhfuil friotaíocht agus inoiriúnaitheacht den scoth ag an aigéad núicléach polymerase agus PCR Mix sa chóras imoibrithe chun gníomhaíocht einsímeach agus cruinneas macasamhlú a chinntiú faoi choinníollacha casta.

Cúigiú, tá an sampla fíocháin atá dírithe ar theicneolaíocht Direct PCR gan aon chóireáil saibhrithe aigéid núicléacha agus an méid teimpléad an-bheag, rud a éilíonn go bhfuil íogaireacht agus éifeachtacht aimplithe thar a bheith ard ag an gcóras imoibrithe.